Extracting Modified Microtubules from Mammalian Cells to Study Microtubule-Protein Complexes by Cryo-Electron Microscopy

Jitske Bak; Lisa Landskron; Thijn R. Brummelkamp; Anastassis Perrakis

doi:10.3791/65126

/

Ekstrahering av modifiserte mikrotubuli fra pattedyrceller for å studere mikrotubuli-proteinkomplekser ved kryo-elektronmikroskopi

JoVE 신문
생화학

This content is Free Access.

JoVE 신문 생화학

Extracting Modified Microtubules from Mammalian Cells to Study Microtubule-Protein Complexes by Cryo-Electron Microscopy

Ekstrahering av modifiserte mikrotubuli fra pattedyrceller for å studere mikrotubuli-proteinkomplekser ved kryo-elektronmikroskopi

DOI:

10.3791/65126-v

•

08:02 min

•

March 03, 2023

•

Jitske Bak, Lisa Landskron, Thijn R. Brummelkamp, Anastassis Perrakis

¹Oncode Institute and Division of Biochemistry,Netherlands Cancer Institute

Chapters

00:05Introduction
00:43Cell Culture and Harvesting
01:30Microtubule Extraction
04:13Cryo-Electron Microscopy (EM) Grid Preparation
06:16Results: Analyzing Microtubule-Protein Complexes
07:34Conclusion

Summary

자동 번역

Her beskriver vi en protokoll for å trekke ut endogent tubulin fra pattedyrceller, som kan mangle eller inneholde spesifikke mikrotubuli-modifiserende enzymer, for å oppnå mikrotubuli beriket for en spesifikk modifikasjon. Vi beskriver deretter hvordan de ekstraherte mikrotubuli kan dekoreres med rensede mikrotubulibindende proteiner for å forberede rister for kryo-elektronmikroskopi.

Ekstrahering av modifiserte mikrotubuli fra pattedyrceller for å studere mikrotubuli-proteinkomplekser ved kryo-elektronmikroskopi

•

•

•

Chapters

Summary

자동 번역

Tags

Article

Embed

플레이리스트에 추가

Usage Statistics

Related Videos

Tandem Affinity Rensing av protein komplekser fra eukaryote celler

Uttrykk og rensing av menneskelige Lipid-sensitive kasjon kanal-TRPC3 for strukturelle vilje av Single-partikkel Cryo-elektronmikroskop

Rask nettforberedelse for tidsavklart kryo-elektronmikroskopi

Single Particle Cryo-Electron Microscopy: Fra prøve til struktur

Mikropattering overføring elektronmikroskopinett til direkte celleposisjonering i hele celler Cryo-Electron Tomography Arbeidsflyter

Samtidig visualisering av dynamikken i krysskoblede og enkle mikrotubuler in vitro av TIRF mikroskopi

En robust kryo-elektronmikroskopi (cryo-EM) prosesseringsarbeidsflyt med kryoSPARC, RELION og scipion

Rensing av allestedsnærværende p53-proteiner fra pattedyrceller

Fremstilling av nukleosomkjernepartikler kompleksert med DNA-reparasjonsfaktorer for kryo-elektronmikroskopi strukturell bestemmelse

Cryo-Electron Microscopy Screening Automation Across Multiple Grids Using Smart Leginon

Read Article