El procedimiento quirúrgico para la inducción de isquemia miembro posterior unilateral se demuestra, con la confirmación de la isquemia por imágenes de perfusión Doppler láser.
En los Estados Unidos, la enfermedad arterial periférica (EAP) afecta a alrededor de 10 millones de personas en todo el mundo y es también frecuente. Tratamientos médicos para el alivio sintomático son limitados. Intervenciones quirúrgicas o endovasculares son útiles para algunas personas, pero a largo plazo resultados suelen ser decepcionantes. Como resultado, existe una necesidad para el desarrollo de nuevas terapias para tratar la enfermedad arterial periférica. La preparación miembro posterior isquemia es un modelo murino de la PAD, y es útil para probar nuevas terapias. Cuando se compara con otros modelos de isquemia tisular, tales como la ligadura de la arteria coronaria o cerebral, ligadura de la arteria femoral establece un modelo más simple de los tejidos isquémicos. Otras ventajas de este modelo son la facilidad de acceso a la arteria femoral y la baja tasa de mortalidad.
En este video, se demuestra la metodología para el modelo murino de isquemia hindimb unilateral. Los materiales y procedimientos específicos para la creación y la evaluación del modelo se describe, incluyendo la evaluación de la perfusión de un miembro por láser Doppler. Este protocolo también puede ser utilizado para el trasplante y el seguimiento no invasivo de las células, lo cual es demostrado por Huang et al. 1.
Hay algunas fuentes de variabilidad a considerar al planear y ejecutar modelos de isquemia extremidades inferiores. En primer lugar, el nivel de la isquemia puede variar de acuerdo a la ubicación de la ligadura con respecto a la de las ramas laterales. Por lo tanto, para mantener la coherencia del modelo, los animales deben ser sometidos a un mismo nivel de la ligadura arterial. Otra fuente de variabilidad en la recuperación isquémica está relacionada con la edad de los animales, con animales jóvenes (6-8 semanas de edad) que tengan más rápida y completa recuperación de las tasas que los animales mayores (8-10 meses), según la evaluación hemodinámica (es decir, láser Doppler perfusión) o funcionales (es decir, prueba de esfuerzo) las medidas. Para los estudios en los que uno está evaluando un agente angiogénico, puede ser preferible utilizar animales de más edad, debido a una mayor diferencia entre los grupos se pueden observar con una intervención terapéutica. Por el contrario, para los estudios en los que uno está evaluando un factor anti-angiogénico, puede ser preferible utilizar los animales más jóvenes para maximizar el efecto del tamaño de tres.
Si se realiza correctamente, debería haber un mínimo de complicaciones tales como sangrado, infección, o la mortalidad. Si se produce una hemorragia por la ruptura accidental de la vena femoral o de otros buques, una presión moderada con un algodón estéril con punta de aplicador o gasa debe ser aplicada en el sitio de la hemorragia hasta que el sangrado se detenga. Los animales que presenten signos de infección debe ser tratada con agentes anti-infecciosos. Los animales presentan gangrena significativa posible que tenga que beeuthanized. Esta complicación es más frecuente en los animales, y en algunas cepas, como los ratones BALB c 4. Además, el modelo de isquemia extremidades inferiores pueden causar dolor leve a moderado. Por lo tanto, los analgésicos como la buprenorfina o carprofeno se debe administrar como sea necesario para el tratamiento del dolor, de acuerdo con las recomendaciones de la IACUC.
En conclusión, hemos demostrado un método simple y reproducible para el estudio de la PAD en un modelo murino de isquemia extremidades inferiores. El modelo de isquemia miembro posterior con láser Doppler de análisis de imágenes es un excelente sistema para el estudio de patologías vasculares y para la evaluación de candidatos terapéuticos.
Los autores agradecen a Andrea Axtell, Satoshi Itoh, MD, Velotta Jeff, MD, Hoyt Grant, Robert C. Robbins, MD, Yu Jin, MD, Tim Doyle, PhD, y el Stanford pequeño núcleo de imágenes de animales para la asistencia técnica. Los autores también agradecen AM Bickford, Inc. para el apoyo del equipo de veterinarios. Esta investigación fue financiada por becas de investigación de los Institutos Nacionales de Salud (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), el tabaco de California las enfermedades relacionadas con el Programa de Investigación de la Universidad de California (15IT-0257 y 0169-1514RT) , y el Instituto de Medicina Regenerativa de California (RS1-00183). NH es apoyado por una beca de la Asociación Americana del Corazón.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Surgical Tools | Tool | Fine Science Tools | ||
Constix Cotton Swabs | Tool | Contec | SC-4 | |
Betadine (Povidone-iodine) | Reagent | PDI | ||
70% alcohol | Reagent | Kendall | ||
Phosphate Buffered Saline | Reagent | Invitrogen | ||
7-0 silk suture | Tool | Genzyme | ||
5-0 vicryl suture | Tool | Ethicon | ||
Electric shaver | Tool | GE | ||
Cautery | Tool | Baxter | ||
Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System | Equipment | Perimed |