片側後肢虚血の誘発のための外科手術は、レーザードップラー血流イメージングによる虚血の確認を、示されている。
米国では、末梢動脈疾患(PAD)は約1,000万人に影響を及ぼし、また普及している世界的です。症状緩和のための薬物療法は限られている。外科手術または血管内介入は、一部の個人のために有用であるが、長期的な結果はしばしば失望させるもの。その結果、PADを治療する新しい治療法を開発するための必要性がある。マウス後肢虚血の準備は、PADのモデルであり、新しい治療法をテストするのに便利です。このような冠動脈や脳動脈の結紮などの組織の虚血の他のモデルと比較すると、大腿動脈の結紮は、虚血組織の単純なモデルのために用意されています。このモデルの他の利点は、大腿動脈と低死亡率へのアクセスが容易です。
このビデオでは、我々は一方的hindimbの虚血のマウスモデルのための方法論を示しています。モデルを作成し、評価するための特定の材料および手順は、レーザードップラーイメージングによる四肢の血流の評価を含め、説明される。このプロトコルは、Huang らによって示されている細胞を、1の移植と非侵襲的な追跡のために利用することができます。
後肢虚血モデルを計画し、実行中に考慮すべき変動性のあるソースがあります。最初に、虚血のレベルでは、側枝のことに関してライゲーションの場所に応じて異なる場合があります。したがって、モデルの一貫性を保つために、動物は動脈結紮の同じレベルを受けなければならない。虚血性回復にばらつきの別のソースが古い動物(8-10ヶ月齢)より速く、より完全な回復率を有する若い動物(6-8週齢)で、動物の年齢に関連している、などの血行動態(つまりによって評価レーザードップラー血流)や機能的な(すなわち、トレッドミル試験)対策。群間差が大きく、治療介入で観察されることがありますので、一つは血管新生阻害剤を評価されている研究については、それは、古い動物を使用することが好ましいかもしれない。逆に、一つの抗血管新生因子を評価されている研究のために、それは効果の大きさ3を最大化するために、若い動物を使用することが好ましいかもしれない。
正しく実行した場合、出血、感染、または死亡のような最小限の合併症があるはずです。出血が大腿静脈または他の船舶、滅菌綿で適度な圧力の偶発的な破壊によって発生する場合は出血が止まるまでアプリケーターまたはガーゼが出血の部位に適用する必要があるチップを渡した。感染の徴候を示す動物は、抗感染剤で処理されるべきである。重要な壊疽を示す動物はbeeuthanizedする必要がある場合があります。この合併症は、高齢の動物で、そのようなBALB cマウス4など一部の菌株で、より一般的です。さらに、後肢虚血モデルでは、軽度から中程度の痛みが発生することがあります。痛みの治療のために、必要に応じてそのため、このようなブプレノルフィンまたはカルプロフェンのような鎮痛薬がIACUCの勧告によると、投与されるべきである。
結論として、我々は、後肢虚血のマウスモデルにおいてPADを研究するためのシンプルで再現性のある方法を示している。レーザードップラーイメージング解析による後肢虚血モデルでは、血管病理を研究するための、治療の候補を評価するための優れたシステムです。
著者はアンドレアアクステル聡伊藤、MD、ジェフVelotta、MD、グラントホイト、ロバートC.ロビンス、MD、金玉、MD、ティムドイル博士、および技術支援のためのスタンフォード大学小動物のイメージングコアを感謝。また、作者は獣医機器のサポートのためにAMビックフォード社に感謝。この研究は国立衛生研究所(R01 HL – 75774、R01 CA098303、R21 HL085743、1K12 HL087746)、カリフォルニア大学のカリフォルニア州のたばこ関連病研究プログラム(15IT – 0257と1514RT – 0169)からの研究補助金によって支えられて、および再生医療(RS1 – 00183)のためのカリフォルニア工科大学。 NHは、アメリカ心臓協会からのフェローシップでサポートされています。
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Surgical Tools | Tool | Fine Science Tools | ||
Constix Cotton Swabs | Tool | Contec | SC-4 | |
Betadine (Povidone-iodine) | Reagent | PDI | ||
70% alcohol | Reagent | Kendall | ||
Phosphate Buffered Saline | Reagent | Invitrogen | ||
7-0 silk suture | Tool | Genzyme | ||
5-0 vicryl suture | Tool | Ethicon | ||
Electric shaver | Tool | GE | ||
Cautery | Tool | Baxter | ||
Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System | Equipment | Perimed |