Denna procedur beskriver detektering och isolering av mus TH17 leukocyter som aktivt utsöndrar IL-17 vid stimulering.
Den MACS Cytokine Sekretion analys teknik kan upptäcka utsöndras cytokiner om den inre cellnivå och känsliga isolering av livskraftiga cytokin-celler som utsöndrar. För att märka IL-17-celler som utsöndrar, en enda cell suspension av mus splenocytes är beredd och stimuleras på 37 ° C med PMA / ionomycin att inducera cytokin sekretion. För att stoppa sekretion celler placeras sedan på is och är utsatta för IL-17 Catch Reagent en bi-specifik antikropp som binder till CD45 på cellytan av leukocyter och IL-17 som det utsöndras och fångade nära cellytan. Sekretion är sedan startas genom att öka temperaturen till 37 ° C och IL-17 är fångade i Catch reagens. Sekretion Då avslutar igen, genom att placera celler på is. För att upptäcka de fångade IL-17, är celler inkuberas med en andra IL-17-specifik antikropp konjugerad till biotin och ett anti-Biotin-PE-antikroppen. Celler kan nu direkt analyseras med flödescytometri eller förberedda för isolering och anrikning av senare märkning med Anti-PE-konjugerade mikrokulor.
TH17 celler spelar en viktig roll inom adaptiv immunitet och det inflammatoriska svaret och är en nyckelkomponent i körning autoimmun inflammation.
Denna video dokument hur du använder Miltenyi mus IL-17 Sekretion-analys – Cell anrikning och Detection Kit (PE). När du gör detta förfarande är det viktigt att ha en uppskattning av frekvensen av IL-17-celler som utsöndrar i din start cellberedningen. Lämplig cellkoncentrationen under märkning och cytokin sekretion perioden förhindrar korskontaminering med andra celler i din fjädring och försäkrar tillförlitliga resultat.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Mouse IL-17 Secretion Assay Cell Enrichment and Detection Kit (PE) | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-094-213 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_98_1005_Mouse_IL_17_Secretion_Assay_Cell_Enrichment_and_Detection_Kit.aspx |
RPMI 1640 | Medium | Miltenyi Biotec | 130-091-440 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_243_293_RPMI_1640.aspx |
CD4-APC | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-091-611 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_327_CD4.aspx |
CD8a-FITC | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-091-605 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_599_328_CD8a.aspx |
Propidium Iodide Solution | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-093-233 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_337_744_Propidium_Iodide_Solution.aspx |
FcR Blocking reagent, mouse | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-092-575 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_601_435_FcR_Blocking_Reagent_mouse_.aspx |
Dead Cell Removal Kit | Reagent | Miltenyi Biotec | 130-090-101 | |
MACSmix Tube Rotator | Instrument | Miltenyi Biotec | 130-090-753 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_34_251_MACSmix_Tube_Rotator.aspx |
gentleMACS™ Dissociator | Instrument | Miltenyi Biotec | 130-093-235 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_709_763_gentleMACS_Dissociator.aspx |
autoMACS Pro Starting Kit | Instrument | Miltenyi Biotec | 130-092-545 | http://www.miltenyibiotec.com/en/PG_651_679_autoMACS_Pro_Starting_Kit.aspx |
MACS Columns | Tool | Miltenyi Biotec | http://www.miltenyibiotec.com/en/NN_115_Columns_at_a_glance.aspx | |
MACS Separator | Tool | Miltenyi Biotec |