Fabbricazione di elettrodi amperometrici
Summary
Questo protocollo descrive come generare elettrodi in fibra di carbonio. Gli elettrodi vengono successivamente utilizzate per rilevare rilascio di catecolamine dalle vescicole con amperometria in fibra di carbonio.
Abstract
Elettrodi in fibra di carbonio sono cruciali per la determinazione del rilascio di catecolamine dalle vescicole in singole cellule per le misure amperometria. Qui, descriviamo le tecniche necessarie per generare rumore basso (<0,5 pA) elettrodi. Le tecniche sono stati modificati dalle descrizioni pubblicato dai ricercatori precedenti (1,2). Gli elettrodi sono fatti con la preparazione delle fibre di carbonio e filettatura individualmente in ciascun tubo capillare utilizzando un vuoto con un filtro per aspirare la fibra. Successivamente, il tubo capillare con la fibra è tirato da un elettrodo estrattore, la creazione di due metà, ognuna con una punta sottile. Gli elettrodi sono immersi in acqua calda, epossidico liquido mescolato con catalizzatore per creare un sigillo di vetro-resina epossidica. Infine, gli elettrodi sono posti in un forno per curare la resina epossidica. Attenta gestione degli elettrodi è fondamentale per garantire che siano fatte in modo coerente e senza danni. Questo protocollo mostra come fabbricare e tagliare elettrodi amperometrici per la registrazione da singole cellule.
Protocol
Discussion
Questo protocollo descrive come generare e tagliare elettrodi amperometrici. Durante le registrazioni amperometrica, un elettrodo di fibra di carbonio è posto contro la superficie di una cellula secretoria. Attività esocitotico si osserva come picchi amperometrico, che indica la corrente elettrochimica causata dal trasferimento di elettroni dopo l'ossidazione delle catecolamine. Con la pratica facendo e taglio elettrodi amperometrici, i livelli di rumore può essere notevolmente migliorato rispetto a molti degli e…
Acknowledgements
Ringraziamo il Dott. Aaron P. Fox presso l'Università di Chicago, nel cui laboratorio di questo protocollo è stato originariamente progettato, e William Roden (Saint Louis University) per un ulteriore sviluppo del protocollo.
Ringraziamo la Fondazione Whitehall e National Science Foundation per il supporto.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes | Reagent | Sigma Aldrich | P23954-100G04 716AJ | Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light. |
| Carbon Fibers | Material | Goodfellow | C005725 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes | Material | Fisher | NC9836768 | |
| Epoxy Resin | Reagent | Miller-Stephenson | Epon Resin 828 | |
| Dissecting Microscope | Instrument | |||
| Electrode Puller | Instrument | Narishige Japan | PP-830 | 1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C |
| Oven | Instrument | set to 100 degrees F. | ||
| Hot plate | Instrument | set to 55 degrees C |
Referências
- Mundorf, M. L., Wightman, R. M. Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells. Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).
- Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. Good practices in single-cell amperometry. Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).
