A técnica é apresentada para a coleta in vivo de amostras de líquido intersticial de sites pertinentes tecido (pele aqui, experimentalmente inflamação) para a medição de produtos bioquímicos mediação dor e inflamação.
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Artigo de método
Bioensaio In-Vivo humanos para a medição de tecidos específicos de Mediadores nociceptiva e inflamatória
Neste artigo
Resumo
Resumo
Este bioensaio in vivo humano pode ser usado para estudar voluntários humanos e pacientes. As amostras são coletadas em sites de tecido pertinentes, tais como a pele através de cateteres inseridos assepticamente microdiálise (Diálise Dermal, Erlangen, Alemanha). Ilustrado neste exemplo é a coleção de líquido intersticial da pele inflamada experimentalmente em voluntários humanos. Coleta de amostras podem ser combinadas com outros testes experimentais. Por exemplo, a avaliação simultânea de produtos bioquímicos localmente liberados e sensibilidade subjetiva a estímulos dolorosos na pele inflamada experimentalmente fornece o link de bioquímica-comportamental fundamental para identificar biomarcadores da dor e inflamação. Ensaio apresentado no organismo humano vivo permite uma visão mecanicista em processos de tecidos específicos subjacentes a dor e / ou inflamação. O método também é adequado para examinar a eficácia das intervenções existentes ou novos - como novos fármacos - visando o tratamento de situações dolorosas e / ou inflamatória. Este artigo irá fornecer uma descrição detalhada sobre o uso de técnicas de microdiálise para coletar o líquido intersticial da lesão de pele inflamada experimentalmente dos sujeitos do estudo humano. As amostras de líquidos intersticiais são normalmente tratados com auxílio de imunoensaios multiplex talão série assaying permitindo até 100 analitos em amostras tão pequenas no volume de 50 microlitros.
Protocolo
Indução da inflamação experimental:
- A queimadura de primeiro grau é induzida em não-bronzeada da pele de um coxa com auxílio de uma fonte calibrada B, ultravioleta (Saalmann multitester SBB LT 499, Saalmann GmbH, Hereford, Alemanha). A queimadura solar é induzida 24 horas antes de iniciar um experimento microdiálise através da aplicação de três vezes a quantidade de luz UVB necessária para causar vermelhidão completa de pele exposta, ou três vezes a dose mínima eritema (MED). O MED é determinado em cada disciplina antes do início do estudo. Entrega exata de energia está assegurada com uma UV-metro (12 RM, Dr. Grobel UV-Electronic GmbH, Ettlingen, Alemanha)....
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Discussão
O uso combinado de técnicas de microdiálise e tecnologia de imunoensaio multiplex é um valioso em tempo real, bioensaio in vivo humana fornecendo informações sobre eventos bioquímicos em tecidos de interesse. Combinados com testes comportamentais, tais como testes de dor, o método permite estudar as interações complexas de produtos bioquímicos mediação dor e inflamação. O método é promissor para 1) identificar biomarcadores tecido específico mediando a dor ea inflamação, 2) proporcionando uma visão mecanicista sobre a patologia das condiçõe.......
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Divulgações
Os autores não têm nada a declarar.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Cateter de microdiálise | Ferramenta | Dialise dérmica | NA | |
| Bomba 22 | Ferramenta | Harvard Apparatus | 552219 | |
| Saalmann Multitester SBB LT 400 | Ferramenta | Saalmann GmbH | NA | |
| Radiômetro RM-12 IP-65 | Ferramenta | Dr. Grobel UV Elektronik GmbH | 82120000/81112100 | |
| Inibidor de protease completo | Reagente | Roche Group | 11836145001 | |
| Tubo microcêntrifugo | Ferramenta | E&K Scientific | 380150-X | |
| Albumina 5% | Reagente | ZLB Behring | NA | |
| Ringer com lactato | Reagente | Hospira Inc. | NA | |
| Xylocaine-MPF | Outro | AstraZeneca | NA | |
| Seringa de 1 mL | Ferramenta | BD Biosciences | 309602 |
Referências
- Angst, M. S., Clark, J. D., Carvalho, B., Tingle, M., Schmelz, M., Yeomans, D. C. Cytokine profile in human skin in response to experimental inflammation, noxious stimulation and administration of a COX-inhibitor: A microdialysis study. Pain. 139, 15-27 (2008).
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Reimpressões e permissões
