إعداد شريحة الأفقي للشبكية
Summary
تقليديا قد استخدمت شريحة الرأسي وإعداد كامل جبل الشبكية لدراسة وظيفة الدوائر الشبكية. هنا ، نحن تصف الرواية تشريح طريقة للحفاظ على مورفولوجيا شجيري الخلايا العصبية في الشبكية سليمة.
Abstract
تقليديا قد استخدمت شريحة الرأسي وإعداد كامل جبل الشبكية لدراسة وظيفة الدوائر الشبكية. ومع ذلك ، فإن العديد من الخلايا العصبية للشبكية ، مثل خلايا عديمة المحوار ، وتوسيع هذه التشعبات أفقيا ، بحيث يفترض أن مورفولوجيا الخلايا لتكون تضررت بشدة في شرائح عمودية. في إعداد كل جبل ، وخاصة بالنسبة للتصحيح ، المشبك التسجيلات والخلايا العصبية للشبكية في الطبقة الوسطى لا يمكن الوصول إليها بسهولة بسبب تغطية واسعة من الخلايا الدبقية endfeets ق (مولر الخلية). هنا ، نحن تصف الرواية تشريح طريقة للحفاظ على مورفولوجيا شجيري الخلايا العصبية في الشبكية سليمة. قدم شريحة أفقيا في الطبقة الداخلية للشبكية باستخدام تقطيع vibratome بعد جزءا لا يتجزأ من شبكية العين في هلام ذوبان agarose درجات الحرارة المنخفضة. في هذا التحضير شريحة أفقية من شبكية العين ، درسنا وظيفة الخلايا العصبية للشبكية مقارنة مورفولوجيا بهم ، وذلك باستخدام التصحيح ، المشبك تسجيل والكالسيوم تقنية التصوير ، وكيمياء سيتولوجية مناعية وحيدة الخلية RT – PCR.
Protocol
Discussion
هناك مزايا عديدة مهمة إعداد شريحة الأفقي للشبكية العين.
الأول ، هو الحفاظ على التشكل من الخلايا التي تعمل على توسيع التشعبات أفقيا ، مثل خلايا عديم الاستطالات والخلايا الأفقية. فقد تبين أن هناك أكثر من 20 نوعا من الخلايا في الشبكية عديم الاستطالات (ماكن?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
نشكر الدكاترة. H. ريتشارد Masland وكانيكو Akimichi لإعطائنا النصائح واقتراحات قيمة لتأسيس الداخلي لإعداد شريحة الأفقي للشبكية العين.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Sigma | A-1296 | ||
| Agarose L | Wako | 317-01182 | Low-temperature melting agarose | |
| Hyaluronidase | Sigma | Type I-S, 300 units/mg | ||
| Medium | in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma) | |||
| Microwave | ||||
| Hot water bath | 35 C | |||
| Vibratome slicer | Leica | VT1000S | ||
| MF-Membrane filters | Millipore | HAWP01300 | Filter paper , pore size 0.45 um | |
| Dissection tools | forceps, blade, pinch, twizzer, etc. | |||
| Instant glue | eg., Alonalpha, Krazy Glu | |||
| 50 ml syringe | ||||
| syringe filter | Millipore | SX0001300 |
Referências
- Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells. Brain Res. , 64-73 (2004).
