Горизонтальное Подготовка Кусочек сетчатки
Summary
Традиционно вертикальная часть и целое монтажа подготовки сетчатки были использованы для изучения функции сетчатки схем. Здесь мы описываем новый метод нарезки сохранить дендритных морфологии нейронов сетчатки без изменений.
Abstract
Традиционно вертикальная часть и целое монтажа подготовки сетчатки были использованы для изучения функции сетчатки схем. Однако многие из нейронов сетчатки, такими как amacrine клеток, расширить свои дендриты горизонтально так, что морфология клетки должна быть серьезно поврежден в вертикальных срезов. В целом монтажа подготовки, особенно для патч-зажим записей, нейронов сетчатки в среднем слое не являются легкодоступными из-за широкого освещения глиальные клетки (Мюллер ячейки) endfeets с. Здесь мы описываем новый метод нарезки сохранить дендритных морфологии нейронов сетчатки без изменений. Срез был сделан горизонтально на внутренний слой сетчатки использованием vibratome слайсер после сетчатки было заложено в низкой температурой плавления агарозном геле. В этом горизонтальные подготовки кусочек сетчатки, мы изучили функцию нейронов сетчатки по сравнению с их морфологии, с помощью патч-зажим записи, техника визуализации кальция, иммуноцитохимия, и одноклеточные RT-PCR.
Protocol
Discussion
Есть несколько важных преимуществ горизонтальной подготовки кусочек сетчатки.
Во-первых, морфология клетки, которые расширяют дендритов горизонтально, таких как amacrine клетки и горизонтальные клетки, сохраняется. Было показано, что Есть более 20 видов amacrine клеток в сетчатке (Макнил и Masland, 1998), т?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим доктора. Ричард Х. Masland и Акимичи Канеко за предоставленную нам ценные советы и предложения устанавливает порядок горизонтальных подготовки кусочек сетчатки.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Agar | Sigma | A-1296 | ||
| Agarose L | Wako | 317-01182 | Low-temperature melting agarose | |
| Hyaluronidase | Sigma | Type I-S, 300 units/mg | ||
| Medium | in mM: 102 NaCl, 3.1 KCl, 2.0 CaCl2, 1.0 MgCl2, 23 NaHCO3, and 10 glucose, maintained at pH 7.8, or, Ames’ Solution (Sigma) | |||
| Microwave | ||||
| Hot water bath | 35 C | |||
| Vibratome slicer | Leica | VT1000S | ||
| MF-Membrane filters | Millipore | HAWP01300 | Filter paper , pore size 0.45 um | |
| Dissection tools | forceps, blade, pinch, twizzer, etc. | |||
| Instant glue | eg., Alonalpha, Krazy Glu | |||
| 50 ml syringe | ||||
| syringe filter | Millipore | SX0001300 |
Referências
- Azuma, T., Enoki, R., Iwamuro, K., Kaneko, A., Koizumi, A., Koizumi, A., TC, J. a. k. o. b. s., Masland, R. H., MA, M. a. c. N. e. i. l., RH, M. a. s. l. a. n. d. Multiple spatiotemporal patterns of dendritic Ca2+ signals in goldfish retinal amacrine cells. Brain Res. , 64-73 (2004).
