Hoge-resolutie video-Tracking van Locomotion in Adult Drosophila melanogaster
Summary
De studie van complexe locomotorisch gedrag in<em> Drosophila melanogaster</em> Is afhankelijk van de mogelijkheid om wijzigingen in de beweging een bepaalde vlieg's te kwantificeren. Dit artikel legt uit hoe u dit doen met behulp van een hoge-resolutie tracking systeem.
Abstract
Vliegen vormen een belangrijk model voor het bestuderen van complex gedrag te wijten aan de overvloed aan genetische tools beschikbaar voor onderzoekers op dit gebied. Studeren locomotorisch gedrag in<em> Drosophila melanogaster</em> Vertrouwt op de mogelijkheid om te kunnen veranderingen in gang te kwantificeren tijdens of naar aanleiding van een bepaalde taak. Om deze reden, een hoge-resolutie video-tracking systeem, zoals degene die we beschrijven in dit artikel, is een waardevol instrument voor het meten van voortbeweging in real-time. Ons protocol omvat het gebruik van een eerste lucht-puls naar de vliegen momentum, gevolgd door een tweeëndertigste filmen periode in een vierkante kamer te breken. Een tracking programma wordt vervolgens gebruikt om de ogenblikkelijke snelheid van elke vlieg te berekenen in de kamer in 10 msec stappen. Analyse software verzamelt vervolgens deze gegevens, en de output een verscheidenheid van parameters zoals gemiddelde snelheid, max snelheid, tijd doorgebracht in beweging, versnelling, enz. Dit protocol zal de juiste voeding en management van vliegen te bespreken voor gedragsverandering taken, handling vliegen zonder verdoving of immobilisatie , het opzetten van een gecontroleerde omgeving, en het uitvoeren van de test van start tot finish.
Protocol
Discussion
In onze opstelling, een matig sterke lucht puls stopt tijdelijk vliegen beweging. Wanneer de lucht signaal eindigt, zijn de vliegen vrijgesteld van deze stationaire toestand en voortbewegen normaal, zoals weergegeven in figuur 2. Omdat deze lucht puls effectief synchroniseert motoriek van de bevolking, we gebruiken om het proces te beginnen, zodat we bestuderen ook het begin van beweging na een momentum-brekende stimulus. De test kan echter worden uitgevoerd zonder een lucht-puls, omdat het bewegingsapparaat parameters …
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door National Institutes of Health Grant R01 GM54408 toegekend aan LC Griffith. We willen graag Fred Wolf bedanken voor al zijn hulp bij het ontwerpen van onze vierkante kamer en het opzetten van onze test, Frank Mello aan de Brandeis University machine winkel voor de bouw van onze kamer, en Dan Valente en Tim Lebestky voor nuttige gesprekken over analyse onderwerpen.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Square Chamber | Tool | Machine Shop | N/A | Design from Wolf et al. 20021 |
| Digital Camera | Camera | Sharp | ViewcamZ VL-23 | |
| Flowmeter | Tool | Cole Parmer | SY-32003-12 | |
| Light Box | Tool | DNASTAR, Inc. | Seq-Easy | |
| Charcoal Filter | Tool | Fisher Scientific | 09-744-37 | |
| DIAS 3.2 | Software | Soll technologies | N/A | www.solltechnologies.com |
Referências
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T. High-Resolution Analysis of Ethanol-Induced Locomotor Stimulation in Drosophila. J Neurosci. 22 (24), 11035-11044 (2002).
- Soll, D. R. The use of computers in understanding how animal cells crawl. International review of cytology. 163, 43-104 (1995).
- Martin, J. R., Ollo, R. A new Drosophila Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase (Caki) is localized in the central nervous system and implicated in walking speed. The EMBO journal. 15 (8), 1865-1876 (1996).
- Levine, J. D., Funes, P., Dowse, H. B. Resetting the Circadian Clock by Social Experience in Drosophila melanogaster. Science. 298, 2010-2012 (2002).
