이 프로토콜은 해부하다하는 방법을 보여줍니다<em> Drosophila</emimmunohistochemistry 및 / 또는 신경근육학 교차점의 이미징을위한 준비> 애벌레.
Abstract
<em> Drosophila</em> 신경근육학 교차점 (NMJ)은 시냅스 개발 및 소성 연구에 사용되는 기존 모델 시스템입니다. 의 널리 사용<em> Drosophila</em> 모터 시스템은 높은 접근성 때문입니다. 이것은 단일 셀 해상도 분석하실 수 있습니다. 그의 배열 주변 본문 벽 내에 알려져 있습니다 hemisegment 30 근육이 있습니다. 35 모터 뉴런의 총 높은 충실도를 가진 패턴 이러한 근육을 첨부합니다. 분자 생물학과 유전학을 사용, 하나는 유전자 변형 동물이나 돌연변이를 만들 수 있습니다. 그런 다음, 하나는 NMJ의 형태와 기능의 발달 결과를 공부할 수 있습니다. 연구 NMJ에 액세스하려면, 그것은 신중하게 각각의 유충을 해부하다하는 것이 필요합니다. 이 문서에서 우리는 제대로 해부하다하는 방법을 보여줍니다<em> Drosophila</em신체 벽은 그대로 둔 동안 모든 내장을 제거하여 NMJ의 연구> 애벌레. 이 기술은 이미징, immunohistochemistry, 또는 전기 생리학에 대한 유충을 준비하기 위해 적합합니다.
Protocol
당신이 시작하기 전에 모든 문화가 25 ° C.에 성장한다 HL3.1 해부 버퍼는 사전에 준비 수 있습니다. HL3.1 50 ML의 나누어지는을 가지고하고 얼음에 보관하십시오. HL3.1에 신선한 3.5 %의 포름 알데히드의 15 ML을 준비합니다. 그 얼음 보관하십시오. 애벌레 해부 해부 접시에 감기 HL3.1 한 방울을 넣어. 이것은 쉽게 사용할 수 있도록 동물을 건?…
Discussion
이 동영상에서 보여주 절개 기법은 실험 기법의 다양한 Drosophila의 애벌레를 준비하는 데 사용할 수 있습니다. 형광 단백질 태그가 존재하는 경우, 애벌레가 탑재 바로 몇 군데 있습니다. 그렇지 않으면, immunostaining는 특정 신경 구획을 표시하기 위해 수행할 수 있습니다. 또한, 전기 생리학 쉽게 neurotransmission의 기능을 평가할 수있는 해부 애벌레에서 수행할 수 있습니다.
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.