Drosophila 애벌레 NMJ의 해부
Summary
이 프로토콜은 해부하다하는 방법을 보여줍니다<em> Drosophila</emimmunohistochemistry 및 / 또는 신경근육학 교차점의 이미징을위한 준비> 애벌레.
Abstract
<em> Drosophila</em> 신경근육학 교차점 (NMJ)은 시냅스 개발 및 소성 연구에 사용되는 기존 모델 시스템입니다. 의 널리 사용<em> Drosophila</em> 모터 시스템은 높은 접근성 때문입니다. 이것은 단일 셀 해상도 분석하실 수 있습니다. 그의 배열 주변 본문 벽 내에 알려져 있습니다 hemisegment 30 근육이 있습니다. 35 모터 뉴런의 총 높은 충실도를 가진 패턴 이러한 근육을 첨부합니다. 분자 생물학과 유전학을 사용, 하나는 유전자 변형 동물이나 돌연변이를 만들 수 있습니다. 그런 다음, 하나는 NMJ의 형태와 기능의 발달 결과를 공부할 수 있습니다. 연구 NMJ에 액세스하려면, 그것은 신중하게 각각의 유충을 해부하다하는 것이 필요합니다. 이 문서에서 우리는 제대로 해부하다하는 방법을 보여줍니다<em> Drosophila</em신체 벽은 그대로 둔 동안 모든 내장을 제거하여 NMJ의 연구> 애벌레. 이 기술은 이미징, immunohistochemistry, 또는 전기 생리학에 대한 유충을 준비하기 위해 적합합니다.
Protocol
Discussion
이 동영상에서 보여주 절개 기법은 실험 기법의 다양한 Drosophila의 애벌레를 준비하는 데 사용할 수 있습니다. 형광 단백질 태그가 존재하는 경우, 애벌레가 탑재 바로 몇 군데 있습니다. 그렇지 않으면, immunostaining는 특정 신경 구획을 표시하기 위해 수행할 수 있습니다. 또한, 전기 생리학 쉽게 neurotransmission의 기능을 평가할 수있는 해부 애벌레에서 수행할 수 있습니다.
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| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
Referências
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
