Drosophila larval Dissection MNJ

Resumo

Este protocolo demonstra como dissecar Drosophila Larvas em preparação para imuno-histoquímica e / ou imagem da junção neuromuscular.

Protocolo

Antes de começar a

1. Todas as culturas devem ser cultivadas a 25 ° C.
2. HL3.1 tampão dissecção pode ser preparado com antecedência. Dê uma alíquota de 50 ml de HL3.1 e mantê-lo no gelo.
3. Prepare 15 ml de formaldeído 3,5% fresco em HL3.1. Mantê-lo no gelo.

Dissecação das larvas

1. Coloque uma gota de HL3.1 fria na placa de dissecção. Isto irá manter o animal de secagem e atordoar o animal tornando-o mais fácil de trabalhar.
2. Usando a pinça longa, selecione um errante larva de terceiro instar e coloque-o na queda de HL3.1.
3. Primeiro, utilize uma pinça curta

Discussão

A técnica de dissecação demonstrou neste vídeo pode ser usado para preparar larvas Drosophila para uma variedade de técnicas experimentais. Se as tags proteína fluorescente estão presentes, as larvas podem ser montados e representado imediatamente. Caso contrário, imunocoloração podem ser realizadas a fim de marca específica compartimentos sináptica. Além disso, eletrofisiologia pode facilmente ser executada no larvas dissecadas para avaliar o funcionamento da neurotransmissão.

O MN.......

Materiais

HL3 buffer Dissection: (em mM) 70 NaCl, KCl 5, 0,2 CaCl2, MgCl2 20, 10 NaHCO3, 5 trealose, 115, sacarose e 5 HEPES, pH 7.3.
Placa Sylgard Dissecando: Misture delicadamente (para evitar bolhas) 10:01 num copo. Despeje a mistura em Placa de Petri (qualquer tamanho). Permitir Sylgard para curar durante a noite em 37C incubadora.