Este protocolo demonstra como dissecar<em> Drosophila</em> Larvas em preparação para imuno-histoquímica e / ou imagem da junção neuromuscular.
Abstract
O<em> Drosophila</em> Junção neuromuscular (MNJ) é um sistema modelo estabelecido utilizada para o estudo do desenvolvimento e plasticidade sináptica. O uso generalizado do<em> Drosophila</em> Motor do sistema é devido a sua alta acessibilidade. Ele pode ser analisado com uma única célula de resolução. Há 30 músculos por hemisegment cuja disposição dentro da parede do corpo periféricos são conhecidas. Um total de 35 neurônios motores atribuem a estes músculos em um padrão que tem alta fidelidade. Utilização da biologia molecular e genética, pode-se criar animais transgênicos ou mutantes. Então, pode-se estudar as conseqüências do desenvolvimento sobre a morfologia ea função do MNJ. Para acessar o MNJ para o estudo, é necessário dissecar cuidadosamente cada larva. Neste artigo vamos demonstrar a maneira correta de dissecar<em> Drosophila</em> Larvas para o estudo do MNJ, removendo todos os órgãos internos, deixando a parede do corpo intacto. Esta técnica é adequada para preparar as larvas para imagens, imuno-histoquímica, ou eletrofisiologia.
Protocol
Antes de começar a Todas as culturas devem ser cultivadas a 25 ° C. HL3.1 tampão dissecção pode ser preparado com antecedência. Dê uma alíquota de 50 ml de HL3.1 e mantê-lo no gelo. Prepare 15 ml de formaldeído 3,5% fresco em HL3.1. Mantê-lo no gelo. Dissecação das larvas Coloque uma gota de HL3.1 fria na placa de dissecção. Isto irá manter o animal de secagem e atordoar o animal tornando-o mais fácil de trabalhar. Us…
Discussion
A técnica de dissecação demonstrou neste vídeo pode ser usado para preparar larvas Drosophila para uma variedade de técnicas experimentais. Se as tags proteína fluorescente estão presentes, as larvas podem ser montados e representado imediatamente. Caso contrário, imunocoloração podem ser realizadas a fim de marca específica compartimentos sináptica. Além disso, eletrofisiologia pode facilmente ser executada no larvas dissecadas para avaliar o funcionamento da neurotransmissão.
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.