Этот протокол свидетельствует о том, как рассекают<em> Drosophila</em> Личинок в подготовке к иммуногистохимии и / или изображений нервно-мышечном соединении.
Abstract
<em> Drosophila</em> Нервно-мышечном соединении (NMJ) является создана модель системы, используемой для исследования синаптических развития и пластичности. Широкое использование<em> Drosophila</em> Двигательного аппарата связано с его высокой доступности. Это могут быть проанализированы с одноклеточных разрешения. Есть 30 мышцы в hemisegment которого механизмом в рамках периферийной стенке тела известны. В общей сложности 35 моторных нейронов придают эти мышцы в шаблон, который имеет высокую точность. Использование молекулярной биологии и генетики, можно создать трансгенных животных или мутанты. Затем, можно изучать последствия развития на морфологию и функцию NMJ. Чтобы получить доступ к NMJ для изучения, необходимо тщательно анализировать каждую личинку. В этой статье мы покажем, как правильно препарировать<em> Drosophila</em> Личинок для изучения NMJ, удалив все внутренние органы, оставляя стенки тела нетронутой. Этот метод подходит для подготовки личинок для работы с изображениями, иммуногистохимии, или электрофизиологии.
Protocol
Перед тем как начать Все культуры следует выращивать при температуре 25 ° C. HL3.1 рассечение буфер может быть подготовлен заранее. Возьмите 50 мл аликвоту HL3.1 и держать его на льду. Подготовка 15 мл свежего 3,5% формальдегида в HL3.1. Держите его на лед. Личинки Dis…
Discussion
Рассечение технику продемонстрировал в этом видео можно использовать для подготовки дрозофилы личинок для различных экспериментальных методик. Если флуоресцентные метки белка присутствуют, личинки могут быть смонтированы и отображаемого сразу. В противном случае, иммунной мог…
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.