Drosophila Larvernas NMJ Dissection
Summary
Detta protokoll visar hur man dissekera<em> Drosophila</em> Larver som förberedelse för immunohistokemi och / eller avbildning av den neuromuskulära förbindelsen.
Abstract
Den<em> Drosophila</em> Neuromuskulära förbindelsen (NMJ) är en etablerad modell som används för studier av synaptiska utveckling och plasticitet. Den utbredda användningen av<em> Drosophila</em> Motorn är på grund av sin höga tillgänglighet. Den kan analyseras med encelliga upplösning. Det finns 30 muskler per hemisegment vars arrangemang inom det perifera kroppen väggen är kända. Totalt 35 motoriska nervceller fäster dessa muskler i ett mönster som har hög trohet. Använda molekylärbiologi och genetik, kan man skapa transgena djur eller mutanter. Sedan kan man studera utveckling konsekvenser på morfologi och funktion NMJ. För att få tillgång till NMJ för studien, är det nödvändigt att noggrant dissekera varje larv. I den här artikeln visar vi hur man korrekt att dissekera<em> Drosophila</em> Larver för studier av NMJ genom att ta bort alla inre organ medan kroppen vägg intakt. Detta är lämpligt att förbereda larver för avbildning, immunohistokemi eller elektrofysiologi.
Protocol
Discussion
Den dissekering tekniken demonstreras i denna video kan användas för att förbereda Drosophila larver för en mängd olika experimentella tekniker. Om fluorescerande proteinet taggar är närvarande, kan larverna monteras och avbildas direkt. Annars kan immunfärgning göras för att markera specifika synaptisk fack. Dessutom kan elektrofysiologi enkelt utföras på dissekerade larver för att utvärdera hur neurotransmission.
Den NMJ i Drosophila har vunnit stor populari…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss | 000000-1063-181 | ||
| 3mm Vannas Spring Scissors | Fine Science Tools Inc. | 15000-0 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | Long forceps | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | Short forceps | |
| SylGard 182 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning Corp. | 3097358-1004 | Used to make dissection plates | |
| Formaldehyde | Sigma-Aldrich Inc. | 252549-25ML | ||
| Stainless Steel Minutien Pins -0.1 MM Diameter | Fine Science Tools Inc. | 26002-10 |
Sylgard Dissecting Plate: Mix gently (to avoid bubbles) 10:1in a beaker. Pour mixture into Petri dish (any size). Allow SylGard to cure overnight in 37C incubator.
Referências
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Vactor, D. V., Sink, H., Fambrough, D., Tsoo, R., Goodman, C. S. Genes that control neuromuscular specificity in Drosophila. Cell. , 73-1137 (1993).
- Feng, . A modified minimal hemolymph-like solution, HL3.1, for physiological recordings at the neuromuscular junctions of normal and mutant Drosophila larvae. J Neurogenet. 18 (2), 377-402 (2004).
