Alcançar alta qualidade e quantidade adequada de ilhotas humanas é um dos pré-requisitos importantes para o transplante de ilhotas bem sucedido. Neste vídeo, descrevemos passo a passo os procedimentos para o isolamento de ilhotas pancreáticas humanas (parte I: a digestão e coleta de tecido pancreático), utilizando um método modificado automatizado.
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Artigo de método
Isolamento Islet humana Pancreatic: Parte I: Digestão e Coleta de tecido pancreático
Neste artigo
Resumo
Resumo
Gestão da diabetes tipo 1 é onerosa, tanto para o indivíduo ea sociedade, custando mais de 100 bilhões de dólares anualmente. Apesar do uso generalizado de monitoramento de glicose e insulina novas formulações, muitas pessoas ainda desenvolvem devastadoras complicações secundárias. Transplante de ilhotas pancreáticas pode restaurar controle quase normais de glicose em pacientes diabéticos
Protocolo
1. Facilidade de instalação
- Isolamento de ilhotas humana é um procedimento sensível ao tempo que envolve o trabalho em equipe e, portanto, quatro pessoas são necessários para realizar este procedimento. A equipe é liderada pelo cirurgião, que disseca e cannulates pâncreas.
- O isolamento das ilhotas começa o minuto a equipe entra na instalação de isolamento de ilhotas UIC. Membros da equipe assegurar que toda a instrumentação necessária, como a centrífuga, é verificada e ligado. Também certifique-se de higienizar todos os capuzes e superfícies.
- Duas pessoas irá definir a tabela de canulação, máquina de lama, circuito digestão, unidade de ....
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Discussão
Há uma variedade de fatores que afetam o resultado de isolamento 9,10. Entre eles, a digestão do tecido pancreático desempenha um papel proeminente. Baseado em nossa experiência humana de isolamento de ilhotas própria, resumimos seguintes pontos críticos, o que poderia influenciar o rendimento de ilhotas e qualidade.
- O tempo de digestão é diferente quando diferentes tipos de enzimas são utilizadas.
- Assim que 40-50% das ilhotas completamente separado do tecido acinar, a digestão deve ser imediatame.......
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Agradecimentos
Apoiada por um financiamento da Universidade de Illinois em Chicago, assim como Cell Resource Islet Centro NIH subvenção (RFA-RR 05-003), a Fundação Christopher, a Fundação Efroymson, ea Fundação Tellabs.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários | |
|---|---|---|---|---|
| Máquina de Slush de Gelo | equipamento | Taylor Company | K4036546 | fazer gelo estéril |
| Centrífuga | equipamento | Beckman Coulter Inc. | 424803 | |
| Microscopia Invertida MZ6 TLBD4.1 | equipamento | Leica Microsystems | 4103 | |
| Placa de Cultura Celular com Grade de 2 mm | equipamento | Nalge Nunc international | 174926 | contagem de ilhotas |
| Banho-Maria Digital EX7 | equipamento | NesLab | 105361058 | |
| Termômetro | equipamento | IBI:IR | 60444 | |
| Balança MonoBloc AB 104-S | equipamento | Mettler Toledo | 1119430864 | medir o peso do pâncreas |
| Controlador de Velocidade MasterFlex II | equipamento | Cole-Parmer | J00006445 | ajustar a velocidade de fluxo durante a digestão |
| Digital Sight DS L1 | equipamento | Nikon Instruments | 217267 | |
| Unidade de Perfusão | equipamento | Custom Made | n/a | |
| Cooler para unidade de perfusão | equipamento | Fisher Scientific | 3013P | |
| Câmara Ricordi | equipamento | University of Miami | n/a | |
| Solução de diluição RPMI | reagente | Mediatech, Inc. | 99783024 | |
| Solução da Universidade de Wisconsin (UW) | reagente | DURAMED | 1000-46-06 | |
| Solução Salina Tamponada de Hank’s (HBSS) | reagente | Mediatech, Inc. | 99-597-CM | |
| Albumina Humana 25% | reagente | GRIFOLS | NDC 61953-0002-2 | |
| Meio M199 (solução de lavagem) | reagente | Mediatech, Inc. | 99-784-CM | |
| Colagenase NB1 grau GMP | reagente | SERVA Electrophoresis | N0002937 | |
| Protease Neutra NB1 grau GMP | reagente | SERVA Electrophoresis | N0002936 | |
| Betadine | reagente | Cardinal Health | 29906-004 | |
| Cefazolina | reagente | West-Ward Pharmaceutical | NDC 0143-9924-90 | |
| Ditizona | reagente | Sigma-Aldrich | D5130 |
Referências
- Shapiro, A. M., et al. Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N Engl J Med. 343, 230-238 (2000).
- Nano, R., et al.
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Reimpressões e permissões
