制作生肌工程的组织结构
Summary
在这里，我们展示了制造胶原蛋白为基础，组织骨骼肌成肌细胞构造。这些工程结构的3 – D可用于更换或修复组织<em>在体内</em>。对于我们而言，我们设计的这些电气管道修复完整的心脏传导阻滞房室<sup“[1]</sup>。
Abstract
尽管事实上，电子起搏器的寿命，节省了医疗设备，他们长期在儿科患者的表现可能会出现问题，由于孩子的小规模的和不可避免的增长所施加的限制。因此，真正需要的是一个专门设计的儿科患者心律紊乱的创新疗法的。我们提出一个含有胶原蛋白为基础的矩阵组成一个导电的生物替代autologously衍生细胞能更好地适应经济增长，减少经常性手术的需要，并大大提高这些患者的生活质量。在本研究中，我们描述了一种结合骨骼肌成肌细胞内的水凝胶矩阵的主要文化时尚手术植入的组织构造，将作为心脏的上下商会之间的电气管道的过程。最终，我们预计，使用这种类型的工程组织，以恢复完整的心脏传导阻滞的儿童房室导电。鉴于此，我们隔离新生儿Lewis大鼠和板到层粘连蛋白涂层的组织培养皿中，使用的既定协议的修改后的版本的骨骼肌成肌细胞<sup> [2，3]</sup>。一两天后，收集和混合培养的细胞用抗生素治疗，1型胶原，基质胶™，和碳酸氢钠<sub> 3</sub>。结果是一种粘稠的，统一的解决方案，可以投成几乎任何形状和大小的模具<sup“[1，4，5]</sup>。对于我们的组织结构，我们聘请1型胶原蛋白的分离，从胎儿的羔羊皮肤使用的标准程序<sup[6]</sup>。一旦组织已经凝固在37℃，培养基是经过精心添加到板块构造，直到被淹没。该工程的组织，然后是允许进一步凝聚通过2天以上脱水，此时它已准备就绪，<em>在体外</em>评估或手术植入。
Protocol
Discussion
在其中的组织构造将铸模可在任何形状和大小，但需要有至少有两个附着点。否则，基质和细胞形成一个球形结构和细胞死亡。在本议定书中，我们描述了一个用于此目的的聚酯网的使用，但我们也成功地应用于不锈钢网。显然，规模较大的模具将需要更多的细胞和其他成分的体积较大。当模具，重要的是尽量减少使用硅酮胶量，以确保它是在位于油管非常两端。这是因为附近的胶粘剂的成肌细?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由来自美国国立卫生研究院的研究补助金（HL068915 HL088206），从长尾研究基金的研究员奖，并在波士顿儿童医院的心脏传导基金捐款支持。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Silicone tubing | VWR | 60985-724 | ||
| Silicone adhesive | Rhodia Silicones | MED ADH 4300 RTV | ||
| Polyester Mesh | McMaster-Carr | 93185T17 | ||
| Laminin | Sigma | L2020 | ||
| Nutrient Mixture F-10 HAM | Sigma | N6908 | ||
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | ||
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen | 15140 | ||
| Fungizone | Invitrogen | 15290-018 | ||
| Dispase-2 | Roche | 10295825001 | ||
| Collagenase 2 | Worthington | 46H8863 | ||
| Basic Fibroblast Growth Factor | Promega | G5071 | ||
| 150 mm tissue culture dishes | BD Falcon | 353025 | ||
| 0.05% (1X) Trypsin-EDTA | Gibco | 25300 | ||
| 1X Hanks Balanced Salt Solution | Invitrogen | 14170-112 | ||
| 7.5% NaHCO3 | Gibco | 25080-094 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 6-well plates | BD Falcon | 353046 | ||
| 50 mL Conical Vial | BD Falcon | 352098 | ||
| 15 mL Conical Vial | BD Falcon | 352099 | ||
| 0.2 μm filter | Nalgene | 194-2520 |
Referências
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).
- Rando, T. A., Blau, H. M. Primary mouse myoblast purification, characterization, and transplantation for cell-mediated gene therapy. J Cell Biol. 125 (6), 1275-1287 (1994).
- Blau, H. M., Webster, C. Isolation and characterization of human muscle cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 78 (9), 5623-5627 (1981).
- Powell, C. Tissue-engineered human bioartificial muscles expressing a foreign recombinant protein for gene therapy. Hum Gene Ther. 10 (4), 565-577 (1999).
- Vandenburgh, H. Tissue-engineered skeletal muscle organoids for reversible gene therapy. Hum Gene Ther. 7 (17), 2195-2200 (1996).
- Gallop, P. M., Seifter, S. Preparation and Properties of Soluble Collagens. Methods in Enzymology. 6, 635-641 (1963).
