Гросс и изобразительных Препарирование Внутреннее ухо Сенсорные эпителия у взрослых данио рерио ( Danio rerio)

Summary

Внутреннее ухо чувствительного эпителия взрослых данио является хорошей модельной системой для понимания механизмов волосы регенерации клеток у взрослых позвоночных. Этот протокол демонстрирует прекрасный рассечение эпителия, через который мы можем получить образцы тканей для изучения регенеративных событий на клеточном и субклеточном уровнях.

Abstract

Нейросенсорная эпителия внутреннего уха являются ключевой структуры для слуха и равновесия функций. Таким образом, важно понимать, клеточном и молекулярном особенности эпителия, которые в основном состоят из двух типов клеток: волосковых клеток (УВ) и опорных клеток (ПК). Здесь мы выбираем для изучения внутреннего уха сенсорно эпителии у взрослых данио не только потому, эпителиальных структур хорошо сохранились и у всех позвоночных изучены, но и потому, что взрослые данио способен к регенерации УВ, возможность, что млекопитающие теряют вскоре после рождения. Мы используем внутреннего уха взрослых данио в качестве модельной системы для изучения механизмов внутреннего уха HC регенерации у взрослых позвоночных животных, которые могли бы быть полезными для клинической терапии слуха / баланс дефицита в человеческом, в результате потери HC.

Здесь мы показываем, как это сделать общей и мелкой вскрытия внутреннего уха сенсорно эпителия у взрослых рыбок данио. Валовой рассечение удаляет тканей, окружающих внутреннее ухо и полезно для подготовки срезов ткани, что позволяет нам изучить детальную структуру сенсорного эпителия. Штрафа рассечение очищает не-сенсорно-эпителиальные ткани каждого отдельного эпителия и позволяет рассматривать неоднородность целом эпителий легко в целом монтажа эпителиальных образцов.

Protocol

Часть 1: Подготовка ткани Эвтаназии взрослых данио с буфером MS-222 (3-этил аминобензоат метансульфонат соли, 0,03%). Обезглавьте рыбы. Отрежьте нижнюю челюсть, место голову на вскрытии пластины с вентральной стороной вверх, и иммобилизации ткани насекомых булавками. Удаление мягк…

Discussion

В этом протоколе, мы описали общей и мелкой рассечение внутреннего уха сенсорно эпителия взрослых данио, которая позволяет нам подготовить образец ткани для изучения клеточных и субклеточных особенностей сенсорного эпителия.

Для того, чтобы осуществлять успешное вскр…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt)	Reagent	Sigma	A5040
PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X)	Reagent	Mediatech	46-013-CM
Paraformaldehyde	Reagent	Sigma	P-6148
Triton X-100	Reagent	Sigma	T8787
Alexa Fluor 488 phalloidin	Reagent	Invitrogen	A12379
VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI	Reagent	Vector Laboratories	H-1500
Dissection microscope	Microscope	Nikon	SMZ1000
Insect pins	Tool	Fine Science Tools	26000-40
Scissors	Tool	Roboz	RS-5880
Tweezers	Tool	Roboz	RS-5045
Needle blade	Tool	Sharpoint	78-6810
Fluorescent microscope	Microscope	Zeiss	Axiovert 200M
Dissection pad	Tool	eNasco	SB07840M
Zebrafish	Animal	various	n/a