Dissection fine et globale de l'épithélium sensoriel de l'oreille interne adultes poisson zèbre ( Danio rerio)
Summary
L'épithélium sensoriel de l'oreille interne de poisson zèbre adulte est un bon modèle pour comprendre les mécanismes de la régénération des cellules de cheveux chez les vertébrés adulte. Ce protocole démontre la dissection fine de l'épithélium, à travers lequel nous pouvons obtenir des échantillons de tissus pour étudier les événements de régénération au niveau cellulaire et subcellulaire.
Abstract
Neurosensoriels épithélium de l'oreille interne sont les structures essentielles pour les fonctions de l'ouïe et l'équilibre. Par conséquent, il est important de comprendre les caractéristiques moléculaires et cellulaires de l'épithélium, qui sont principalement composés de deux types de cellules: cellules ciliées (HC) et les cellules de soutien (SCS). Ici nous choisissons d'étudier l'épithélium sensoriel dans l'oreille interne de poisson zèbre adulte, non seulement parce que les structures épithéliales sont hautement conservée chez tous les vertébrés étudiés, mais aussi parce que le poisson zèbre adulte est capable de régénérer HC, une capacité qui mammifères perdent peu après la naissance. Nous utilisons l'oreille interne des poissons zèbres adultes comme un système modèle pour étudier les mécanismes de l'oreille interne HC régénération dans les vertébrés adultes qui pourraient être utiles pour la thérapie clinique de l'audition / équilibre des déficits dans l'homme comme un résultat de la perte de HC.
Ici, nous montrer comment faire des dissections globale et fine de l'épithélium sensoriel dans l'oreille interne de poisson zèbre adulte. La dissection brute supprime les tissus entourant l'oreille interne et est utile pour préparer des coupes de tissus, ce qui nous permet d'examiner la structure détaillée de l'épithélium sensoriel. La dissection fines nettoie les tissus non-sensori-épithéliales de l'épithélium de chaque individu et nous permet d'examiner l'hétérogénéité de l'épithélium ensemble facilement dans l'ensemble de montage des échantillons épithéliales.
Protocol
Discussion
Dans ce protocole, nous avons décrit la dissection fine et globale de l'épithélium sensoriel de l'oreille interne de poisson zèbre adulte, ce qui nous permet de préparer l'échantillon de tissu pour l'étude des fonctions cellulaires et subcellulaires de l'épithélium sensoriel.
Afin de réaliser une dissection de succès, la toute première étape, la fixation, est très importante. Assurez-vous que vous utilisez toujours une solution de paraformaldéhyde fraîchem…
Acknowledgements
Cette recherche a été financée par le Programme de recherche intra-muros de la National Human Genome Research Institute, National Institutes of Health.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
