Gross und Fine Dissection of Inner Ear Sinnesepithelien in Adult Zebrafisch ( Danio rerio)
Summary
Das Innenohr Sinnesepithel der erwachsenen Zebrafisch ist ein gutes Modell für das Verständnis der Mechanismen der Haare Zellregeneration bei erwachsenen Wirbeltieren. Dieses Protokoll zeigt die feinen Sezierung der Epithelien, durch die wir Gewebeproben zur Untersuchung der regenerativen Veranstaltungen auf zellulärer und subzellulärer Ebene können.
Abstract
Neurosensorische Epithelien im Innenohr sind die entscheidenden Strukturen für die Hör-und Gleichgewichtsstörungen Funktionen. Daher ist es wichtig, die zellulären und molekularen Eigenschaften der Epithelien, die vor allem von zwei Arten von Zellen zusammengesetzt sind zu verstehen: Haarzellen (HC) und Stützzellen (SCS). Hier wählen wir an das Innenohr Sinnesepithelien bei erwachsenen Zebrafisch nicht nur studieren, weil der epithelialen Strukturen stark in allen Wirbeltieren studiert konserviert sind, sondern auch, weil die erwachsenen Zebrafisch ist in der Lage, Kohlenwasserstoffe, eine Fähigkeit, die Säugetiere verlieren kurz nach der Geburt zu regenerieren. Wir verwenden das Innenohr von adulten Zebrafisch als Modellsystem, um die Mechanismen des Innenohrs HC Regeneration bei erwachsenen Wirbeltieren, die hilfreich für die klinische Therapie des Hörens / Balance Defizite in der menschlichen als Folge der HC Verlust könnte zu studieren.
Hier zeigen wir, wie auf grobe und feine Sezieren des Innenohres Sinnesepithelien bei erwachsenen Zebrafisch zu tun. Der Brutto-Dissektion entfernt die umgebenden Gewebe des Innenohrs und ist hilfreich für die Vorbereitung Gewebeschnitten, die uns die detaillierte Struktur der Sinnesepithelien untersuchen können. Die feinen Sezierung bereinigt die nicht sensorisch-epithelialen Geweben der einzelnen Epithel und ermöglicht es uns, die Heterogenität der ganzen Epithel leicht prüfen, in ganz-mount epithelialen Proben.
Protocol
Discussion
In diesem Protokoll beschrieben wir die grobe und feine Zerlegung des Innenohrs Sinnesepithelien der erwachsenen Zebrafisch, die uns Gewebeprobe zur Untersuchung der zellulären und subzellulären Eigenschaften der Sinnesepithelien vorbereiten können.
Um die Durchführung einer erfolgreichen Präparation der allererste Schritt, Fixierung, ist sehr wichtig. Stellen Sie sicher, dass Sie immer frisch zubereitet Paraformaldehydlösung weil alte Lösung in unter-Fixierung der Gewebe, die schwer …
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde durch die Interne Research Program des National Human Genome Research Institute, National Institutes of Health unterstützt.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate salt) | Reagent | Sigma | A5040 | |
| PBS (Phosphate-buffered Saline, 10X) | Reagent | Mediatech | 46-013-CM | |
| Paraformaldehyde | Reagent | Sigma | P-6148 | |
| Triton X-100 | Reagent | Sigma | T8787 | |
| Alexa Fluor 488 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12379 | |
| VECTASHIELD Hard Set Mounting Medium with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1500 | |
| Dissection microscope | Microscope | Nikon | SMZ1000 | |
| Insect pins | Tool | Fine Science Tools | 26000-40 | |
| Scissors | Tool | Roboz | RS-5880 | |
| Tweezers | Tool | Roboz | RS-5045 | |
| Needle blade | Tool | Sharpoint | 78-6810 | |
| Fluorescent microscope | Microscope | Zeiss | Axiovert 200M | |
| Dissection pad | Tool | eNasco | SB07840M | |
| Zebrafish | Animal | various | n/a |
