Zebrafish में लेंस प्रत्यारोपण और आँखों म्यूटेंट के विश्लेषण में इसके अनुप्रयोग
Summary
लेंस विकास के अन्य ऊतकों के साथ बातचीत शामिल है. कई zebrafish आँख म्यूटेंट एक असामान्य रूप से छोटे लेंस के आकार के द्वारा विशेषता है. यहाँ हम एक लेंस प्रत्यारोपण के प्रयोग के लिए निर्धारित करें कि क्या इस phenotype आंतरिक कारण बनता है या ऊतकों है कि लेंस के चारों ओर के साथ बातचीत दोषपूर्ण कारण है प्रदर्शित करता है.
Abstract
लेंस ऑप्टिक [1,2] कप के विकास में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. एक मॉडल जीव के रूप में zebrafish का उपयोग, लेंस के विकास के बारे में सवालों को संबोधित किया जा सकता है. zebrafish आनुवंशिक अध्ययन के लिए छोटे आकार, उच्च उपजाऊपन, लघु जीवन चक्र, और देखभाल की आसानी सहित कई लाभप्रद विशेषताओं, की वजह से उपयोगी है. लेंस zebrafish में तेजी से विकास होता है. 72 HPF, zebrafish लेंस कार्यात्मक परिपक्व है [3] आनुवंशिक और आणविक प्रचुर मात्रा में संसाधनों zebrafish में अनुसंधान का समर्थन करने के लिए उपलब्ध हैं. इसके अलावा, zebrafish आँख की अन्य रीढ़ के उन लोगों के लिए समानता मानव दोषों के एक उत्कृष्ट पशु मॉडल [4-7] के रूप में इसके उपयोग के लिए आधार प्रदान करता है. कई zebrafish म्यूटेंट लेंस असामान्यताएं प्रदर्शन सहित कोशिका मृत्यु का उच्च स्तर, [8] जो कुछ मामलों में लेंस के ऊतकों की एक पूरी अध: पतन की ओर जाता है,
निर्धारित करें कि क्या लेंस असामान्यताएं आंतरिक कारणों के लिए या आसपास के ऊतकों के साथ दोषपूर्ण बातचीत के लिए कारण हैं, एक आँख जंगली प्रकार में एक उत्परिवर्ती लेंस का प्रत्यारोपण किया जाता है. का उपयोग आग पॉलिश धातु सुई, उत्परिवर्ती या जंगली प्रकार के लेंस ध्यान दाता जानवर से dissected हैं, और मेजबान में स्थानांतरित. जंगली प्रकार और उत्परिवर्ती ऊतकों को भेद करने के लिए, एक ट्रांसजेनिक लाइन दाता के रूप में प्रयोग किया जाता है. यह पंक्ति लेंस सहित, सभी ऊतकों में झिल्ली बाध्य GFP व्यक्त. यह प्रत्यारोपण तकनीक zebrafish लेंस म्यूटेंट के अध्ययन में एक अनिवार्य उपकरण है.
Protocol
Discussion
कई चरणों लेंस प्रत्यारोपण के दौरान विशेष ध्यान की आवश्यकता होती है.
- सुई बढ़ाई: यह लेंस प्रत्यारोपण ले जाने से पहले कई सुई तैयार करने के लिए बेहतर है, और सुई की नोक के रूप में संभव के रूप में पतली होना…
Acknowledgements
यह प्रक्रिया एक बड़ी हद तक प्रत्यारोपण तकनीक गुफा मछली के लिए बिल जेफरी की प्रयोगशाला द्वारा विकसित करने के लिए निम्नानुसार है.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 0.1mm diameter tungsten wire | A Johnson Matthey | 45086 | ||
| Agarose(low melting point) | Sigma | 39346 | ||
| Borosilicate glass capillaries | World Precision Instruments | TW 100-4 | ||
| Forceps | Dumont #5 | 11252-30 | ||
| Pasteur pipette | Fisher | 13-678-20C | ||
| Pipette pump | Fisher | 13-683C | ||
| Petri Dish | CardinalHealth | D1906 | ||
| Penicillin-streptomycin | GIBCO | 15140-122 |
Referências
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- Yamamoto, Y., Jeffery, W. R. Central role for the lens in cave fish eye degeneration. Science. 289, 631-633 (2000).
- Easter, S. S., Nicola, G. N. The development of vision in the zebrafish(Danio rerio). Dev Biol. 180, 646-663 (1996).
- Schmitt, E., Dowling, J. Early eye morphogenesis in the zebrafish. Brachydanio rerio. J.comp. Neuro. 344 (4), 532-542 (1994).
- Malicki, J. Harnessing the power of forward genetics–analysis of neuronal diversity and patterning in the zebrafish retina. Trends Neurosci. 23 (11), 531-541 (2000).
- Malicki, J., Pujic, Z., Thisse, C., Thisse, B., Wei, X. Forward and reverse genetic approaches to the analysis of eye development in zebrafish. Vision Res. 42 (4), 527-533 (2002).
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- Godinho, L., Mumm, J. S., Williams, P. R., Schroeter, E. H., Koerber, A., Park, S. W., Leach, S. D., Wong, R. O. Targeting of amacrine cell neurites to appropriate synaptic laminae in the developing zebrafish retina. Development. Nov 132, 5069-5079 (2005).
