HC11 lactogenic 차별화는 mammospheres이라고 돔 구조의 형성에 의해 특징 수 있습니다. 구조 lactogenic 차별 quantifying에 투입 위상 콘트라스트 현미경에 의해 열거 수 있습니다.
Abstract
일반적으로 내유 마우스 상피 세포 배양에 lactogenic 분화의 정도를 결정하는 데 사용 phenotypic 측정 mammospheres이라고 돔 모양의 세포 구조의 형성이다<sup> 1</sup>. HC11 세포 라인은 내유 lactogenic 분화 모두의 규제 연구를위한 모델 시스템으로 채용되었습니다<em> 체외에서</em>과<em> 생체내에</em<sup> 2</sup>. HC11 세포 lactogenic 호르몬 치료에 대한 응답으로 우유 단백질을 차별하고 종합. 합류하는 HC11 마우스 상피 세포 내유의 성장에 따라, lactogenic 차별화는 dexamethasone, 인슐린 및 prolactin 포함한 lactogenic 호르몬 조합의 추가에 의해 유도된으로 DIP 언급했다. 차별화 유도 HC11 세포 1백20시간 게시물 분화의 유도 및 열거되었다 각 문화에 나타난 mammospheres의 수에 번에서 촬영했다. 개인 mammospheres의 크기는 분화의 정도와 연결합니다 그리고 이것은 차별 세포의 이미지에 그려져 있습니다.
Protocol
HC11 세포 10% 소태아 혈청, 5μg/ml 인슐린, 10 MM HEPES, 능력을 확립하기 위해 10ng/ml 표피 성장 인자 (EGF)와 보충 RPMI 1640 배지에서 6 일간 합류로 성장했다. 세포는 PBS로 씻어 24 시간 동안 EGF없이 성장 미디어에 유지했다. lactogenic 차별을 유발하는 세포 차별화 미디어, dexamethasone과 함께 즉 RPMI (10 -6 M), 인슐린 (5 μg / ML)과 같은 DIP라고 prolactin (5 μg / ML)에 incubated했다. 명시된 시간 이후 DI…
Discussion
위해서는이 기술에 대한 성공과 최고의 품질의 상피 세포가 lactogenic 호르몬으로 유도되고 이전에 합류 유지되어야합니다. 부량 어려운 만드는 수많은 mammospheres가있다 상황이있을 수 있습니다. 따라서, 정량 목적은 mammospheres의 숫자가 계산되는 수있는 때 시점에서 mammospheres을 사진에 좋습니다.
내유 상피 세포의 분화 lactogenic에 노출된 정도를 확인하는 데 사용되는 다양한 ?…
Acknowledgements
Congressionally 감독 의학 연구 기금 부여 (DAMD17 – 01-0264)에서 ML 커틀러와 ML 커틀러하는 방법 United States 군사 암 연구소에 기금이 작업을 지원합니다.
Morrison, B., Cutler, M. L. Mouse Mammary Epithelial Cells form Mammospheres During Lactogenic Differentiation. J. Vis. Exp. (32), e1265, doi:10.3791/1265 (2009).