Souris cellules épithéliales mammaires forme Mammospheres cours de la différenciation lactogène

Summary

HC11 différentiation lactogène peut être caractérisée par la formation de structures en forme de dôme appelé mammospheres. Les structures peuvent être énumérés par microscopie à contraste de phase afin d'aider à quantifier différentiation lactogène.

Abstract

Une mesure phénotypique communément utilisé pour déterminer le degré de différenciation dans le lactogène mammaire de la souris des cultures de cellules épithéliales est la formation de structures cellulaires en forme de dôme appelé mammospheres¹. La ligne HC11 cellule a été employé comme un système modèle pour l'étude de la régulation de la différenciation lactogène mammaires fois<em> In vitro</em> Et<em> In vivo</em². Le HC11 cellules se différencient et synthétisent les protéines de lait dans la réponse au traitement avec des hormones lactogènes. Suite à la croissance de la souris HC11 cellules épithéliales mammaires à confluence, la différenciation a été induite lactogène par l'ajout d'une combinaison d'hormones lactogènes dont la dexaméthasone, d'insuline, et la prolactine, appelé DIP. Le HC11 cellules induites à se différencier ont été photographiés à des moments jusqu'à 120 heures après l'induction de la différenciation et le nombre de mammospheres qui est apparu dans chaque culture a été dénombrée. La taille de la mammospheres individuelle est corrélée avec le degré de différenciation et cela est représenté dans les images des cellules différenciées.

Protocol

Le HC11 cellules ont été cultivées à confluence pendant 6 jours en milieu RPMI 1640 complété avec du sérum de veau foetal à 10%, l'insuline 5μg/ml, HEPES 10 mM, 10ng/ml de facteur de croissance épidermique (EGF) pour établir la compétence. Les cellules ont été lavées avec du PBS et maintenus dans un milieu de croissance sans EGF pendant 24 heures. Pour induire la différenciation lactogène les cellules sont incubées dans les médias de différenciation, c'est à dire RPMI avec la dexaméthas…

Discussion

Pour que cette technique soit réussie et de la meilleure qualité, les cellules épithéliales doivent être maintenues à confluence avant d'être induites par des hormones lactogènes. Il peut y avoir des situations où il ya de nombreuses mammospheres, ce qui rend la quantification difficile. Ainsi, à des fins quantitatives, il est préférable de photographier les mammospheres à un point alors que le nombre de mammospheres est capable d'être comptés.

Bien qu'il existe di…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
RPMI		Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum		Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine		Gibco	25030
PenStrep		Gibco	15140
Hepes		Quality Biologicals	118089060
EGF		Sigma	E9644
Insulin		Gibco	12585-014
Dexamethasone		Sigma	D1756
Microscope		Olympus	IX71
Digital Camera		QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394