gentleMACS Dissociatorを使用してマウスの肺組織からの単細胞懸濁液の標準化の準備
Summary
特定の組織型から解離し細胞は組織の攪拌のための特定のパラメータは、実行可能な、培養可能な細胞の大量を取得する必要があります。ミルテニーgentleMACS dissociatorは、シンプルで実用的なプロトコルを使用してこのタスクを最適化します。本書では肺組織でこの装置の使用は説明されています。
Abstract
組織からの単細胞懸濁液の調製は、細胞の研究で多くの実験のための重要な前提条件です。全体の臓器を解離のプロセスは、再現可能な方法で生細胞の高い数値を得るために特定のパラメータが必要です。 gentleMACS Dissociatorは、シンプルで実用的なプロトコルを使用してこのタスクを最適化します。楽器は、マウスの肺を含む組織の種類、様々な効率的ですが穏やかな解離のために最適化され、事前にプログラム設定が含まれています。本書ではマウス由来の肺組織でgentleMACSのDissociatorの使用が示されている。
Protocol
無菌条件下で動作するように、それは層流フード内のすべての手順を実行することをお勧めします。 1。材料 HEPES緩衝液：10mMのHEPES – NaOHでpH7.4の、150mMのNaCl、5mMのKClを、1mMのMgCl 2、1.8 mMのCaCl 2で ） コラゲナーゼD溶液：コラゲナーゼD：HEPESバッファーで100 mg / mLの（コラゲナーゼD> 0.15 U / mg）を、 DNase I溶液：20,000 U / mlのDNase I <…
Discussion
このビデオでは、我々はマウスの肺組織の解離のための新しい方法を導入する。我々は、肺組織の機械的および酵素処理の組み合わせが可能な白血球と内皮細胞の高い割合をもたらしたことを示している。特に、組織の機械的な崩壊は、gentleMACSのDissociatorによって達成された。ステータシステム、穏やかな方法で解離の組織 – gentleMACS Cチューブは、ローターが含まれています。手順は、機器?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、ミルテニーバイオテク社、ドイツの従業員です。
Materials
Referências
- Swanson, K. Flt3-Ligand, IL-4, GM-CSF, and Adherence-Mediated Isolation of Murine Lung Dendritic Cells: Assessment of Isolation Technique on Phenotype and Function. J. Immunol. 173, 4875-4881 (2004).
- Vermaelen, K., Pauwels, R. Accurate and simple discrimination of mouse pulmonary dendritic cell and macrophage populations by flow cytometry: Methodology and new insights. Cytometry Part A. 61A, 170-177 (2004).
Citar este artigo
Jungblut, M., Oeltze, K., Zehnter, I., Hasselmann, D., Bosio, A. Standardized Preparation of Single-Cell Suspensions from Mouse Lung Tissue using the gentleMACS Dissociator. J. Vis. Exp. (29), e1266, doi:10.3791/1266 (2009).