病毒诱导的基因沉默（VIGS）烟草benthamiana和番茄
Summary
病毒诱导的基因沉默（VIGS）的基因表达击倒在方法的说明<em>烟草benthamiana</em>和西红柿。
Abstract
RNA干扰（RNAi）是一个非常具体的的由双链RNA 1引发的基因沉默的现象。这沉默机制使用RNA的监管的两大类：小分子RNA，这是从非蛋白质编码基因和短干扰RNAs（siRNAs）。植物利用RNAi技术来控制转座子和发挥对发育过程中，如花器官的形成和叶的发展 2,3,4的严格控制。植物也利用RNA干扰抵御感染病毒本身。因此，许多病毒已经进化的基因抑制基因沉默，让他们成功定植其主机5。
病毒诱导的基因沉默（VIGS）是一种方法，它利用植物RNAi介导的抗病毒防御机制。在未修改病毒感染的植物的机制是专门针对病毒的基因组。然而，与病毒载体携带来自宿主基因的序列，这个过程可以额外针对相应的主机的mRNA。 VIGS已适应高通量功能基因组学在植物使用的植物病原农杆菌提供，通过其Ti质粒，重组病毒携带整个或部分沉默针对性的基因序列。全身病毒的传播和内源性植物RNAi的机械，其余的照顾。相应的靶基因的dsRNAs生产，然后到21至24个核苷酸的siRNA的核糖核酸酶Dicer的切割。这些siRNAs最终指导的RNA诱导的沉默复合体（RISC）降解目标成绩单2。
在VIGS已采用不同载体和最常用的是基于对烟草脆裂病毒（TRV）。 TRV是一个双边的病毒，正因为如此，两个不同的答农杆菌株用于VIGS。其中一个进行pTRV1，而另一方面，pTRV2，港口的外壳蛋白和用于VIGS 6,7序列编码的病毒复制和运动功能。接种benthamiana烟草和番茄幼苗混合两种菌株在基因沉默的结果。内源性的八氢番茄红素脱氢酶（PDS）的基因，这将导致漂白，沉默是用来作为VIGS的效率控制。但是，应该指出，在番茄的沉默通常小于 N中的有效benthamiana。应始终感兴趣的基因的RNA转录本丰度测量，以确保有效地被下调的靶基因。然而，从北外源基因序列benthamiana可以用他们各自的同源基因沉默番茄，反之亦然8。
Protocol
Discussion
病毒诱导的基因沉默是一种方法，允许快速反向遗传筛选。它避免了新一代的T – DNA或转座子介导的基因敲除，这是只有在某些植物如拟南芥和玉米。它也避开了厂房改造耗时的过程，并允许针对多个基因在同一时间，只要他们有足够的同源性10或不同的主机上的靶序列，同时安排在沉默载体6，11 。
然而，沉默是没有100％有效，因此，必须小心解释结果…
Acknowledgements
我们感谢她的手稿上的有价值的见解博士帕特里夏Manosalva。经费是由美国国家科学基金会植物基因组计划，获奖数量DBI – 0605059。
Referências
- Voinnet, O. RNA silencing as a plant immune system against viruses. Trends Genet. 17, 449-459 (2001).
- Carrington, J. C., Ambros, V. Role of microRNAs in plant and animal development. Science. 301, 336-338 (2003).
- Chen, X. A microRNA as a translational repressor of APETALA2 in Arabidopsis flower development. Science. 303, 2022-2025 (2004).
- Palatnik, J. F. Control of leaf morphogenesis by microRNAs. Nature. 425, 257-263 (2003).
- Brigneti, G. Viral pathogenicity determinants are suppressors of transgene silencing in Nicotiana benthamiana. EMBO J. 17, 6739-6746 (1998).
- Liu, Y., Schiff, M., Dinesh-Kumar, S. P. Virus-induced gene silencing in tomato. Plant Journal. 31, 777-786 (2002).
- MacFarlane, S. A. Molecular biology of the tobraviruses. J. Gen. Virol. 80, 2799-2807 (1999).
- Senthil-Kumar, M. A systematic study to determine the extent of gene silencing in Nicotiana benthamiana and other Solanaceae species when heterologous gene sequences are used for virus-induced gene silencing. New Phytol. 176, 782-791 (2007).
- McCullen, C. A., Binns, A. N. Agrobacterium tumefaciens and plant cell interactions and activities required for interkingdom macromolecular transfer. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 22, 101-127 (2006).
- Rosebrock, T. R. A bacterial E3 ubiquitin ligase targets a host protein kinase to disrupt plant immunity. Nature. 448, 370-374 (2007).
- Miki, D., Itoh, R., Shimamoto, K. RNA silencing of single and multiple members in a gene family of rice. Plant Physiol. 138, 1903-1913 (2005).
- Voinnet, O. Use, tolerance and avoidance of amplified RNA silencing by plants. Trends Plant Sci. 13, 317-328 (2008).
- Ekengren, S. K., Liu, Y., Schiff, M., Kumar-Dinesh, S. P., Martin, G. B. Two MAPK cascades, NPR1, and TGA transcription factors play a role in Pto-mediated disease resistance in tomato. Plant J. 36, 905-917 (2003).
- Liu, E., Page, J. E. Optimized cDNA libraries for virus-induced gene silencing (VIGS) using tobacco rattle virus. Plant. Methods. 4, 5-5 (2008).
