成年大鼠心脏心肌细胞的原代培养

Summary

在本文中，我们描述了一个典型的成年大鼠心脏心肌细胞分离和培养。胶原酶和蛋白酶消化，分离单个心肌细胞。心肌细胞培养遵守此协议满足大多数实验要求。

Abstract

原代培养成年啮齿类动物的心脏细胞，心血管研究的一个重要的模型系统。不过，建立强大的，可行的的培养成人心肌细胞可以在技术上具有挑战性的，速率限制，许多研究者的一步。在这里，我们描述了一个协议，以获得一个可行的几天停留在文化的成年大鼠心脏心肌细胞的高产。心是孤立的，与胶原酶和蛋白酶灌注下低钙^{2 +}恢复单个心肌细胞的条件。钙^{2 +}容错细胞得到逐步增加细胞外Ca^{2 +}集中在三个随后的清洗步骤。被过滤，在培养液中悬浮细胞，并镀金层粘连蛋白涂单。使用此协议培养的心肌细胞获得长达4天的可行和适合最，包括电生理学，生物化学，影像和分子生物学的实验。

Protocol

部分一，准备进行手术大鼠手术的前一天，确信所有的解决方案，但不添加任何酶。缓冲器A，B和洗涤缓冲液都应该被过滤为不育之前存储。缓冲区都应该保存在4 ° C 10-20微克/毫升层粘连蛋白在2 mL 1XSFM以及前一天必须镀有6孔组织培养板，并应存放在37 ° C中的CO 2培养箱。 在手术当天，准备用70％乙醇消毒钳，剪刀，镊子，手术器械，并让他们干纸巾。 充满0.5 …

Discussion

关键的一步，这是挂在离体心脏灌注系统的速度。酶消化期的长短可能会有点不同的各组大鼠。调整取决于软心定期的消化期后成为。 “缓慢复苏的Ca ^{2 +}内切酶消化后获得的Ca ^{2 +}宽容健康的细胞至关重要。

豚鼠，该协议是相同的，除了透明质酸是第十四蛋白酶，而不是使用。通常情况下，我们发现，最初的活细胞百分比是豚鼠至大鼠相比，虽然他们生存，仅…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
NaCl		Sigma	S6191
KCl		Sigma	P9541
HEPES		Sigma	H4034
K2HPO4		Sigma	P9666
MgSO4		Fluka	63068
Glucose		Sigma	G7021
CaCl2		Sigma	C7902
Heparin Sodium Salt		Sigma	H4784
Collagenase Type II		Worthington Biochemical	LS004176
Protease XIV		Sigma	P5147
2,3-Butanedione Monoxime (BDM)		Sigma	B0753
Carnitine		Sigma	C9500
Taurine		Sigma	T0625
Glutamic Acid		Sigma	G1501
BSA		Sigma	A3294
Creatine		Sigma	C3630
Antibiotic		Cellgro	30-009-CI
Media 199		GIBCO	11150
FBS		Hyclone	SH30071.03
Laminin		BD Bioscience	354232
water bath		Fisher Scientific	15-462-5
variable flow chemical pump		Fisher Scientific	15-077-67
6-well culture plate		Corning	3516