在本文中,我们描述了一个典型的成年大鼠心脏心肌细胞分离和培养。胶原酶和蛋白酶消化,分离单个心肌细胞。心肌细胞培养遵守此协议满足大多数实验要求。
原代培养成年啮齿类动物的心脏细胞,心血管研究的一个重要的模型系统。不过,建立强大的,可行的的培养成人心肌细胞可以在技术上具有挑战性的,速率限制,许多研究者的一步。在这里,我们描述了一个协议,以获得一个可行的几天停留在文化的成年大鼠心脏心肌细胞的高产。心是孤立的,与胶原酶和蛋白酶灌注下低钙<sup> 2 +</sup>恢复单个心肌细胞的条件。钙<sup> 2 +</sup>容错细胞得到逐步增加细胞外Ca<sup> 2 +</sup>集中在三个随后的清洗步骤。被过滤,在培养液中悬浮细胞,并镀金层粘连蛋白涂单。使用此协议培养的心肌细胞获得长达4天的可行和适合最,包括电生理学,生物化学,影像和分子生物学的实验。
关键的一步,这是挂在离体心脏灌注系统的速度。酶消化期的长短可能会有点不同的各组大鼠。调整取决于软心定期的消化期后成为。 “缓慢复苏的Ca 2 +内切酶消化后获得的Ca 2 +宽容健康的细胞至关重要。
豚鼠,该协议是相同的,除了透明质酸是第十四蛋白酶,而不是使用。通常情况下,我们发现,最初的活细胞百分比是豚鼠至大鼠相比,虽然他们生存,仅…