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Biologia

La recolección y preparación de Drosophila Los embriones de registro electrofisiológico y otros procedimientos

Published: May 20, 2009
doi:
10.3791/1347
, ,
1Department of Biological Sciences,University of Illinois, 2Department of Biological Sciences,Vanderbilt University

Summary

Esta técnica expone al neuromusculatura Drosophila embrionarias para inmunohistoquímica o de registro electrofisiológico. Es útil para el estudio de los primeros eventos en el desarrollo neuromuscular o la realización de electrofisiología en los mutantes que no pueden eclosionar.

Abstract

Drosophila es un modelo genético de primera para el estudio de ambos el desarrollo embrionario y funcional neurociencia. Tradicionalmente, estos campos son muy aislados unos de otros, con historias en gran medida independiente y la comunidad científica. Sin embargo, la relación entre estos campos por lo general diferentes programas de desarrollo es la base de adquisición de las propiedades funcionales de señalización eléctrica y la diferenciación de las sinapsis químicas funcional durante las fases finales de la formación de circuitos neuronales. Esta interfaz es una zona muy importante para la investigación. En Drosophila, estas fases de desarrollo funcional se producen durante un período de <8 horas (a 25 ° C) durante el último tercio de la embriogénesis. Este período de desarrollo tardío fue considerado durante mucho tiempo difíciles de investigación debido a la deposición de una cutícula dura, epidérmico impermeable. Un avance avance fue la aplicación de agua de polimerización pegamento quirúrgico que puede aplicarse localmente a la cutícula para permitir la disección controlada de la última etapa de embriones. Con una incisión longitudinal dorsal, el embrión puede ser en plano, dejando al descubierto el cordón nervioso ventral y la musculatura de la pared del cuerpo para la investigación experimental. Este sistema ha sido muy utilizada para aislar y caracterizar mutantes genéticos que impiden la formación de sinapsis embrionario, por lo que revelan los mecanismos moleculares que regulan la especificación y diferenciación de las sinapsis y conexiones sinápticas propiedades funcionales de señalización.

Protocol

Parte 1: Equipos y Suministros Un microscopio de disección se requiere una buena disección de embriones, se sugiere la ampliación de 40X, 25X, con los ojos las piezas para aumentar al máximo aumento. Pinzas finas (número 5) se requieren para la selección manual de los embriones y devitellinization de embriones. Equipo para realizar y modificar las finas agujas de vidrio es necesario. Tira de vidrio se requieren agujas para la disección. Preferimos vidrio sólido para la disección (…

Discussion

Clasificación precisa de los embriones es crítica debido a la rápida maduración de las propiedades funcionales en el transcurso de tiempo de tan sólo varias horas. Varios problemas complican la puesta en escena. En primer lugar, la mayoría de los investigadores utilizan huevo tiempo pone a los embriones de etapa, pero el tiempo de puesta de huevos puede variar enormemente de un animal a otro en diferentes condiciones (Broadie et al. 1992). En particular, las mujeres con una dieta limitada tienden a retener los hue…

Acknowledgements

KB es apoyado por el NIH subvención GM54544.

Materials

Material Name Tipo Company Catalogue Number Comment
Embryo Collection Cages   Genesee Scientific (www.flystuff.com) 59-100 (for 60 mm dish; other sizes available) Cages can also be home made using punctured tri-pour beakers, as shown in video
Sylgard 184   Dow Corning Available from various companies Surgical glue adheres better to sylgard-coated coverslips
Fine glass tubing, outer diameter 1.0-1.5 mm   various   For pulling into fine glass needles for dissection and tubes for glue delivery
Plastic tubing, to attach to glass pipette for mouth suction and glue application   Tygon   Tubing inner diameter needs to match glass outer diameter.
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Citar este artigo
Featherstone, D. E., Chen, K., Broadie, K. Harvesting and Preparing Drosophila Embryos for Electrophysiological Recording and Other Procedures. J. Vis. Exp. (27), e1347, doi:10.3791/1347 (2009).
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