कार्बनिक सॉल्वेंट और एसिटिक एसिड के बिना जी 250 Coomassie के साथ जैल में प्रोटीन की धुंधला
Summary
Coomassie खूब (CBB) ब्लू polyacrylamide जैल में G-250 के साथ प्रोटीन धुंधला के लिए एक छोटी प्रोटोकॉल CBB के साथ शास्त्रीय धुंधला प्रक्रियाओं के रूप में कार्बनिक सॉल्वैंट्स या एसिटिक एसिड का उपयोग कर के बिना वर्णित है.
Abstract
शास्त्रीय प्रोटीन धुंधला Coomassie खूब (CBB) ब्लू, विषैले और ज्वलनशील कार्बनिक (मेथनॉल, इथेनॉल, या 2-propanol) और सॉल्वैंट्स एसिटिक एसिड के उच्च सामग्री के साथ समाधान का उपयोग प्रोटोकॉल के निर्धारण के लिए उपयोग किया जाता है, धुंधला हो जाना और प्रोटीन की एक जेल में एसडीएस बाद destaining – PAGE. प्रक्रिया को गति, एक कम समय के लिए माइक्रोवेव ओवन में धुंधला समाधान हीटिंग के लिए अक्सर इस्तेमाल किया है. यह विषाक्त या खतरनाक मेथनॉल, इथेनॉल या 2-propanol और जो सुरक्षा कारणों की वजह से बचा जाना चाहिए प्रयोगशाला में एसिटिक एसिड के मजबूत गंध के वाष्पीकरण में आमतौर पर परिणाम. एक प्रोटोकॉल मूल EM Wondrak (US2001046709 (A1), US6319720 (B1)) द्वारा दो पेटेंट आवेदनों में प्रकाशित में, धुंधला समाधान के एक वैकल्पिक संरचना का वर्णन है जिसमें कोई विलायक कार्बनिक अम्ल या प्रयोग किया जाता है. CBB bidistilled पानी में भंग कर रहा है (60-CBB जी 250 प्रति लीटर के 80mg) और 35 मिमी एचसीएल केवल धुंधला समाधान में अन्य यौगिक के रूप में जोड़ा जाता है. जेल के CBB staning bidistilled पानी में जेल की एसडीएस पृष्ठ और पूरी तरह से धोने के बाद किया जाता है. धोने के दौरान जेल हीटिंग और कदम धुंधला करके इस प्रक्रिया को तेजी से समाप्त किया जा सकता है और कोई विषाक्त या खतरनाक compunds evaporating हैं. प्रोटीन का धुंधला 1 मिनट के भीतर पहले से ही समाधान धुंधला में जेल हीटिंग के बाद होता है और एक थोड़ा नीले रंग की पृष्ठभूमि है कि पूरी तरह से bidistilled पानी में दाग जेल के लंबे समय तक धोने के द्वारा destained है के साथ 15-30 मिनट के बाद पूरी तरह से सना हुआ प्रोटीन को प्रभावित किए बिना, विकसित बैंड.
Protocol
Discussion
- धोने कदम प्रोटीन के कुशल धुंधला के लिए महत्वपूर्ण हैं. 2 मिनट या पानी (50ml <) की कम मात्रा के नीचे एक कम समय धोने पीली नीली प्रोटीन बैंड, सबसे अधिक संभावना जेल में उच्च अवशिष्ट एसडीएस की मात्रा के कारण में परिणाम ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम Ines Racké की तकनीकी सहायता को स्वीकार करना चाहते हैं.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Coomassie Brilliant Blue G-250 | AppliChem | A3480 | any other CBB G-250 could be used as well | |
| Concentrated HCl |
References
- Wondrak, E. M. Process for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
- Wondrak, E. M. Solution for fast visualization of protein. US patent. , (2001).
