Parkinson Hastalığı için murin Model: 6-OH Dopamin Lezyon Davranış Testi
Summary
Parkinson hastalığı, deneysel 6-OH-dopamin tarafından tetiklenen olabilir striatum, dopaminerjik innervasyon kaybına neden olur. Biz stereotaksik lezyon gerçekleştirmek ve farelerde apomorfin bağlı dönme davranışı nasıl izleneceğini açıklar. Bu model, Parkinson hastalığı için yeni tedavilerin test etmek için faydalı ve güvenilir.
Abstract
Parkinson hastalığı (PH), cinsiyeti ne olursa olsun, dünya çapında en az 6,5 milyon insan, sosyal, etnik, ekonomik veya coğrafi sınırları etkiler. Tremor, rijidite ve bradikinesia gibi anahtar belirtileri, dopaminerjik hücrelerin yaklaşık 3 / 4 substantia nigra kaybolur geliştirmek ve striatal motor devrelerin düzgün, koordineli bir düzenleme sağlamak için başarısız. Depresyon ve halüsinasyonlar yaygındır ve demans sonunda hastaların% 20'sinde ortaya çıkar. Şu anda, PD ilerlemesini geciktirmek ya da durdurmak için herhangi bir tedavi yoktur. Aksine, bu belirtilerin azaltılmasına yönelik ilaçlar mevcut amacı daha fazla. Yeni cerrahi stratejiler derin beyin yapıları elektrik stimülasyonu ile fonksiyonel hasar devreleri üzerinde geri dönüşümlü geçiş olabilir, ancak derin beyin stimülasyonu büyük bir ilerleme olmasına rağmen, tüm hastalar için uygun değildir. Bu nedenle preklinik modellerde yeni hücre tedavisi yaklaşımları test etmek için gerekli kalır.
Dopaminerjik yolların Seçici nörotoksik bozulması, uyuşturucu ve oksidatif zararlı kimyasallar tüketen ise (1-metil-4-fenil-1 ,2,3,6-tertahydropyridine) 6-hydroxydopamine (6 OHDA) veya MPTP enjeksiyon yoluyla çoğaltılabilir kemirgenler PD özgü özellikleri de ürer. MPTP aksine, 6-OHDA lezyonlar büyük geri dönüşümsüz nöronal kaybı neden, tek veya iki taraflı olabilir. 6-OHDA lezyon modeli güvenilir, sağlam bir motor defisiti yol açar, ve en yaygın rats1 araştırma 40 yıl sonra kullanılır. Aşılı hücreleri ve ev sahibi arasındaki etkileşimleri sıçanlarda ziyade farelerde daha ayrıntılı çalışılmıştır gibi, model 2,3, son zamanlarda 4 karakterize edilmiştir farelerde aktarılmıştır.
Bu video, nasıl yavaş yavaş bir stereotaxically eklenen mikro şırınga iğnesi ile 6-OHDA 2.0 mcL sunarak lezyon anestezi farelerin sol Nigro-striatal yolu göstermektedir. Dopaminerjik girdi kaybı gün içinde oluşur ve fonksiyonel bozukluklar, dopaminerjik ajanlar 5 tarafından indüklenen derece hayvan dönmeler tarafından post-operatif haftalar ve aylar boyunca izlenebilir . Burada, apomorfin tek bir subkutan uygulamadan 10 dakika sonra meydana gelen tüm vücut kontralateral dönmeler, lezyonun sonra bir ay ölçülen göstermektedir. Çıktıları ve dezavantajları aşağıda tartışılmıştır.
Protocol
Discussion
Nigro striatal yolun kapsamlı tek taraflı lezyon, striatum içine 6-OHDA tek bir stereotaksik enjeksiyon yoluyla farelerde güvenilir bir şekilde elde edilebilir. Lezyonun ölçüde videoda gösterildiği gibi, tirozin hidroksilaz (DA sentezi aşamasında hız sınırlama, yani dihidroksifenilalanine L-Tyrosine dönüşüm katalize) immünohistokimya ile post-mortem doğrulanmış olabilir.
In vivo olarak, apomorfin ile indüklenen kontralateral dönmeler amfetamin bağlı ipsilateral dö…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Fundação de Amparo tarafından desteklenen bir Pesquisa Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) ve Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). Biz yorum bize el yazması ve video geliştirmemize yardımcı anonim hakemlere teşekkür ediyoruz.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ketamine hydrochloride | König | 90-120 mg/Kg | ||
| Xylazine hydrochloride | König | 10 mg/Kg | ||
| Atropine Sulfate | Isofarma | Isofarma | ||
| 6 – Hydroxydopamine Hydrochloride | Sigma-Aldrich | 5 μg/μL | ||
| L – Ascorbic Acid | USB Corporation | 0.2% | ||
| Xylocaine (Lidocaine Chloridrate) |
ASTRA Chemistry | 5% 50 mg |
||
| Nebacetin (Neomycin Sulfate + Bacitracin) | Altana Pharma | 5 mg/g + 250 Ul/g | ||
| R-(-)-Apomorphine hydrochloride | Sigma-Aldrich | 0.5 mg/Kg | ||
| GenTeal lOphthalmic ointment Hypromellose |
NOVARTIS | 0.33% |
||
| Ibuprofen | Abbott | 4 mg/ 100 ml drinking water | ||
| Povidine | JohnsonDiversey | |||
| R-(-)-Apomorphine hydrochloride | Sigma-Aldrich | 0.5 mg/Kg |
Referências
- Ungerstedt, U. 6-hydroxy-dopamine induced degeneration of central monoamine neurons. Eur. J. Pharmacol. 5, 107-110 (1968).
- Akerud, P., Canals, J. M., Snyder, E. Y., Arenas, E. Neuroprotection through delivery of glial cell line-derived neurotrophic factor by neural stem cells in a mouse model of Parkinson’s Disease. J. Neurosci. 21, 8108-8118 (2001).
- Ghosh, A., Roy, A., Liu, X., Kordower, J. H., Mufson, E. J., Hartley, D. M., Ghosh, S., Mosley, R. L., Gendelman, H. E., Pahan, K. Selective inhibition of NF-kappaB activation prevents dopaminergic neuronal loss in a mouse model of Parkinson’s Disease. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, 18754-18759 (2007).
- Alvarez-Fischer, D., Henze, C., Strenzke, C., Westrich, J., Ferger, B., Höglinger, G. U., Oertel, W. H., Hartmann, A. Characterization of the striatal 6-OHDA model of Parkinson’s disease in wild type and a-synuclein-deleted mice. Exp. Neurol. 210, 182-193 (2008).
- Ungerstedt, U. 6-Hydroxydopamine-induced degeneration of the nigrostriatal dopamine pathway: The turning syndrome. Pharmacology and Therapeutics Part B: General and Systematic Pharmacology. 2, 37-40 (1976).
- . . Guidelines for the Care and Use of Mammals in Neuroscience and Behaviour Research. , 209 (2003).
- Franklin, K. B. J., Paxinos, G. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (1997).
- Hudson, J. L., Horne, C. G. v. a. n., Strömberg, I., Brock, S., Clayton, J., Masserano, J., Hoffer, B. J., Gerhardt, G. A. Correlation of apomorphine- and amphetamine-induced turning with nigrostriatal dopamine content in unilateral 6-hydroxydopamine lesioned rats. Brain Res. , 626-6167 (1993).
- Truong, L., Allbutt, H., Kassiou, M., Henderson, J. M. Developing a preclinical model of Parkinson’s disease: A study of behaviour in rats with graded 6-OHDA lesions. Behav. Brain Res. 169, 1-9 (2006).
- Harvey, B. K., Wang, Y., Hoffer, B. J. Transgenic rodent models of Parkinson’s disease. Acta Neurochir. (Wien.). 101, 89-92 (2008).
- Isacson, O. Ole Isacson: Development of New Therapies for Parkinson’s Disease. JoVE. 3, (2007).
