Machen Gynogenetic Diploid Zebrafisch von Anfang Druck
Summary
Dies ist ein Verfahren zur Erzeugung gynogenetic diploid Zebrafischembryonen (Embryonen, deren einzige genetische Beitrag kommt von der Mutter) durch die Blockierung der zweiten Reifeteilung unmittelbar nach der Befruchtung mit UV-Licht-inaktivierten Sperma. EP Embryonen sind nicht vollständig homozygot durch Rekombination während der ersten meiotischen Teilung, aber sie sind homozygot überhaupt loci, die nicht von ihrem Zentromer wurden durch Rekombination getrennt.
Abstract
Heterozygotie in diploiden Eukaryoten macht oft genetische Studien umständlich. Methoden, die lebensfähige homozygoten diploiden Nachkommen zu erzeugen direkt aus heterozygoten Weibchen ermöglichen F1 mutagenisierten Weibchen direkt für schädliche Mutationen gescreent werden in einem beschleunigten freuen genetische Bildschirm. Streisinger et al.<sup> 1,2</sup> Beschriebenen Verfahren zur Herstellung gynogenetic (homozygot) diploid Zebrafisch durch Aktivierung Zebrafisch-Eier mit UV-Licht-inaktivierten Spermien und verhindert dadurch entweder der zweiten meiotischen oder das erste zygotischen Zellteilung durch physikalische Behandlungen (Wärme oder Druck), dass deploymerize Mikrotubuli. Die "early pressure" (EP)-Methode blockiert die Meiose II, die kurz nach der Befruchtung auftritt. Die EP-Methode erzeugt einen hohen Anteil an lebensfähigen Embryonen, die zu fruchtbaren Erwachsenen beiderlei Geschlechts entfalten können. Das Verfahren erzeugt Embryonen, die homozygot in allen loci mit Ausnahme derjenigen, die von ihren Centromer durch Rekombination während der Meiose I. Homozygote Mutationen sind in EP Kupplungen zwischen 50% für Zentromer loci und weniger als 1% für Telomer-Loci entdeckt wurden voneinander getrennt sind. Diese Methode stammt wörtlich aus der Zebrafisch Buch reproduziert<sup> 3</sup>.
Protocol
Discussion
Es ist wichtig, um sicherzustellen, dass Embryonen nach diesem Verfahren hergestellten wahre gynogenetic Diploiden sind. Als Kontrollen erzeugen eine Kupplung von normalen diploiden Eier (indem sie beiseite einige der Spermien ohne UV-Inaktivierung) und eine Kupplung von haploiden Embryonen (indem sie beiseite ein Gelege von Eiern mit UV Spermium befruchtet, ohne durch die EP-Verfahren). An 1 Tag nach der Befruchtung haploide Embryonen haben einen kurzen Körper Achse, unregelmäßige Gehirn und Somiten Morphologie. Hap…
Acknowledgements
Verfahren zur in-vitro-Fertilisation und gynogenetic Diploiden wurden Zebrafisch von Charline Walker in George Streisinger Labor an der University of Oregon in den 1970er und 1980er Jahren entwickelt. Die hier beschriebene Methode ist unverändert von Charline die Protokolle, die verfügbar sind in voller Höhe in der Zebrafisch Book 3.
Verfahren zur in-vitro-Fertilisation und gynogenetic Diploiden wurden Zebrafisch von Charline Walker in George Streisinger Labor an der University of Oregon in den 1970er und 1980er Jahren entwickelt. Die hier beschriebene Methode ist unverändert von Charline die Protokolle, die verfügbar sind in voller Höhe in der Zebrafisch Book 3.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tricaine | Sigma | |||
| Watch glass | ||||
| French Press | ||||
| Pressure cylinder | ||||
| Instant ocean | ||||
| Pasteur pipettes | Cut off the narrow end, fire polish | |||
| UV cross-linker | ||||
| microcapillaries |
Referências
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genética. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Westerfield, M. . The Zebrafish Book: A guide for the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).
- Johnson, S. L., Africa, D., Horne, S., Postlethwait, J. H. Half-tetrad analysis in zebrafish: mapping the ros mutation and the centromere of linkage group I. Genética. 139 (4), 1727-1727 (1995).
- Beattie, C. E., Raible, D. W., Henion, P. D., Eisen, J. S. Early pressure screens. Methods Cell Biol. 237 (71), 2575-25 (1999).
- Johnson, S. L. Centromere-linkage analysis and consolidation of the zebrafish genetic map. Genética. 142 (4), 1277-1277 (1996).
- Trede, N. S. Zebrafish mutants with disrupted early T-cell and thymus development identified in early pressure screen. Dev Dyn. 237 (9), 2575-2575 (1999).
