Este é um método para a geração de embriões diplóides gynogenetic zebrafish (embriões cuja única contribuição genética vem da mãe), bloqueando a segunda divisão meiótica imediatamente após a fertilização com esperma de luz ultravioleta inativado. EP embriões não são totalmente homozigótica devido à recombinação durante a primeira divisão meiótica, porém eles são homozigotos em todos os loci que não foram separadas de suas centrômero por recombinação.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Fazendo Zebrafish Diplóide Gynogenetic por pressão inicial
Neste artigo
Resumo
Resumo
Heterozigosidade em eucariotos diplóides muitas vezes faz estudos genéticos pesado. Métodos que produzir descendentes viáveis diplóide homozigoto diretamente de mulheres heterozigotas permitir que as fêmeas F1 mutagenizados para ser exibido diretamente para mutações deletérias em uma tela acelerado para frente genética. Streisinger et al.
Protocolo
Visão geral da pressão inicial
Nota: receitas para muitos dos reagentes utilizados neste protocolo, como tricaina, peixes de água salina e Hanks estão disponíveis online no capítulo 10 do Livro Zebrafish 3 ( http://zfin.org/zf_info/zfbook/zfbk.html )
- Produzir embriões por fertilização in vitro com esperma inativado UV.
- Transferir imediatamente os ovos fertilizados em um frasco de vidro (com uma tampa de encaixe de plástico) cheia até a borda com água de ovo. Cobrir a extremidade aberta do frasco com uma folha fina de látex de borracha e encaixe a parte ....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
É importante certificar-se que os embriões produzidos por este método são diplóides gynogenetic verdade. Como controles, gerar uma ninhada de ovos diplóides normal (mantendo de lado algum do esperma sem UV inativação) e uma embreagem de embriões haplóides (mantendo de lado uma ninhada de ovos fertilizados com esperma UV sem passar pelo procedimento EP). Menos 1 dia após a fertilização de embriões haplóides têm um eixo de corpo curto, cérebro e morfologia irregular somito. Haplóides não são viáveis após 2-3 dias. Dipló.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Agradecimentos
Métodos de fertilização in vitro e diplóides gynogenetic foram desenvolvidos para zebrafish por Charline Walker no laboratório de George Streisinger na Universidade de Oregon nos anos 1970 e 1980. O método descrito aqui não é alterado a partir de protocolos Charline, que estão disponíveis na íntegra em O Livro Zebrafish 3.
Métodos de fertilização in vitro e diplóides gynogenetic foram desenvolvidos para zebrafish por Charline Walker no laboratório de George Streisinger na Universidade de Oregon nos anos 1970 e 1980. O método descrito aqui não é alterado a partir de protocolos Charline, que estão disponíveis na íntegra em O Livr....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Tricaina | Sigma-Aldrich | ||
| Vidro de relógio | |||
| Prensa de French | |||
| Cilindro de pressão | |||
| Instant ocean | |||
| Pipetas de Pasteur | Retirar a extremidade estreita, polir com chama | ||
| Cross-linker de UV | |||
| Microcapilares |
Referências
- Streisinger, G. Segregation analyses and gene-centromere distances in zebrafish. Genetics. 112 (2), 311-311 (1986).
- Streisinger, G. Production of clones of homozygous diploid zebra fish (Brachydanio rerio). Nature. 291 (5813), 293-293 (1981).
- Weste....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
