بطاقات المواد الفلورية ذبابة الفاكهة
Summary
نحن هنا وصف بروتوكول الأساسية لوصفها الفلورسنت من عناصر مختلفة من الأنابيب القلب من اليرقة وتعليم الكبار<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em>. وهذه عينات مناسبة تماما للتصوير المجهري الفلورسنت أو عبر مبائر. هذا الأسلوب يسمح التحليل البنيوي مفصلا لملامح قلوب من كائن نموذج قوية.
Abstract
و<em> ذبابة الفاكهة السوداء البطن</em> سفينة الظهرية ، أو القلب ، هو بنية أنبوبية تتألف من طبقة واحدة من مقلص العضلية ، والخلايا التي تأموري محاذاة على طول كل جانب من جدار القلب والعضلات alary داعمة ، ولدى البالغين ، وهي طبقة من خلايا العضلات البطنية الطولية. البيت ألياف مقلص الحفظ المكونة من التهندس الخلوي بما في ذلك العضلات حزم المكتظ اللييفات العضلية ومجمعات البروتين هيكل الخلية / غشائي جزئيا ، والتي تتفاعل مع المكونات مثلي من المصفوفة خارج الخلية. نحن هنا وصف بروتوكول لتثبيت ووضع العلامات الفلورية عضلة القلب من العناصر ولا سيما من قلوب الكبار واليرقات تشريح شبه سليمة<em> ذبابة الفاكهة</em>. تحديدا ، علينا أن نظهر للتوسيم sarcomeric F – أكتين وα – actinin في قلوب اليرقات. بالإضافة إلى ذلك ، نقوم بوضع العلامات على F – أكتين وα actinin في الميوسين ، معربا عن GFP الذباب الكبار وα – actinin وpericardin ، وهو نوع الكولاجين الرابع المصفوفة خارج الخلية ، في قلوب الكبار البرية النوع. ويولى اهتمام خاص لوضع استراتيجية متزايدة لقلوب الكبار شبه سليمة تقلل إلى أدنى حد ويحسن التعامل مع الفرصة للحفاظ على سلامة القلب والأنابيب الأنسجة المرتبطة بها. هذه الاستعدادات هي مناسبة للتصوير المجهري عبر الفلورسنت ومبائر. عموما ، هذا الإجراء يسمح لتحليل دقيق ومفصل من الخصائص الهيكلية للقلب قوي وراثيا من النظام النموذجي لين العريكة.
Protocol
Discussion
هنا نقدم بروتوكول مفيدة لإعداد وتلطيخ الظهرية melanogaster ذبابة الفاكهة السفن والأنسجة المرتبطة بها عن طريق التصوير المجهري أو مبائر الفلورسنت. ونحن نقدم سردا موجزا للخطوات التي المكرر واستخداما في مختبرنا للتلوين الفعالة التي تسمح جيدا حلها في الموقع من التص…
Acknowledgements
المؤلفان بالشكر SI برنشتاين (جامعة ولاية سان دييغو) لقراءة نقدية واقتراحات مفيدة بشأن إعداد هذه المخطوطة. وأيد هذا العمل عن طريق منح المعاهد الوطنية للصحة لبرنشتاين SI ، SDSU ، ور بودمر ، BIMR ؛ وزمالة في مرحلة ما بعد الدكتوراه من الدول الغربية التابعة لرابطة القلب الأميركية إلى Vogler زاي وألف Cammarato.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich® | E4378 | |
| Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich® | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen™ | A12381 | |
| Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories, Inc. | H-1200 | |
| Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
Referências
- Brent, J. R., Werner, K. M., McCabe, B. D. Drosophila larval NMJ dissection. J Vis Exp. , (2009).
- Molina, M. R., Cripps, R. M. Ostia, the inflow tracts of the Drosophila heart, develop from a genetically distinct subset of cardial cells. Mech Dev. 1, 51-59 (2001).
- Dulcis, D., Levine, R. B. Glutamatergic innervation of the heart initiates retrograde contractions in adult Drosophila melanogaster. J Neurosci. 2, 271-280 (2005).
- Zeitouni, B. Signalling pathways involved in adult heart formation revealed by gene expression profiling in Drosophila. PLoS Genet. 10, 1907-1921 (2007).
- Robertson, C. W. The metamorphosis of Drosophila melanogaster, including an accurately timed account of the principal morphological change. J. Morphol. 2, 351-399 (1936).
- Miller, A. . The internal anatomy and histology of the imago of Drosophila melanogaster. , (1950).
- Rizki, T. M. The circulatory system and associated cells and tissues. , (1978).
- Cammarato, A. Myosin transducer mutations differentially affect motor function, myofibril structure, and the performance of skeletal and cardiac muscles. Mol Biol Cell. 2, 553-562 (2008).
- Taghli-Lamallem, O. Dystrophin deficiency in Drosophila reduces lifespan and causes a dilated cardiomyopathy phenotype. Aging Cell. 2, 237-249 (2008).
- Kelso, R. J. a database documenting a GFP protein-trap insertion screen in Drosophila melanogaster. Nucleic Acids Res. 32, D418-D420 (2004).
- Dietzl, G. A genome-wide transgenic RNAi library for conditional gene inactivation in Drosophila. Nature. 7150, 151-156 (2007).
- Mery, A. The Drosophila muscle LIM protein, Mlp84B, is essential for cardiac function. J Exp Biol. 211, 15-23 (2008).
