के फ्लोरोसेंट लेबलिंग ड्रोसोफिला हार्ट संरचनाएं
Summary
यहाँ हम लार्वा और वयस्क से दिल ट्यूबों के विभिन्न तत्वों के फ्लोरोसेंट लेबलिंग के लिए एक बुनियादी प्रोटोकॉल का वर्णन<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em>. इन नमूनों में हैं फ्लोरोसेंट या confocal माइक्रोस्कोपी के माध्यम से इमेजिंग के लिए अच्छी तरह से अनुकूल है. इस तकनीक को एक शक्तिशाली मॉडल जीव से दिल की सुविधाओं का विस्तृत संरचनात्मक विश्लेषण परमिट.
Abstract
<em> ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em> पृष्ठीय पोत, या दिल की, एक ट्यूबलर सिकुड़ा cardiomyocytes, pericardial कोशिकाओं है कि दिल की दीवार, सहायक alary मांसपेशियों और वयस्कों में, उदर अनुदैर्ध्य मांसपेशी कोशिकाओं की एक परत के प्रत्येक पक्ष के साथ संरेखित के एक एकल परत के शामिल संरचना है. सिकुड़ा फाइबर घर मांसपेशियों cytoarchitecture के myofibrils और cytoskeletal / submembranous प्रोटीन परिसरों, जो बाह्य मैट्रिक्स के मुताबिक़ घटकों के साथ बातचीत की घनी पैक बंडलों सहित घटक संरक्षित. यहाँ हम dissected लार्वा और अर्द्ध बरकरार वयस्क के दिलों से विशेष दौरे तत्वों का निर्धारण और फ्लोरोसेंट लेबलिंग के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन<em> ड्रोसोफिला</em>. विशेष रूप से, हम लार्वा दिलों में एफ actin sarcomeric लेबलिंग और α-actinin के प्रदर्शित करता है. इसके अतिरिक्त, हम एफ actin और α-actinin मायोसिन-GFP में लेबलिंग वयस्क मक्खियों व्यक्त प्रदर्शन और α actinin और pericardin, एक प्रकार चतुर्थ कोशिकी मैट्रिक्स कोलेजन के जंगली प्रकार वयस्क दिल में. अर्द्ध बरकरार वयस्क दिल के लिए एक बढ़ते रणनीति है कि से निपटने के कम से कम है और हृदय ट्यूब और जुड़े ऊतकों की अखंडता बनाए रखने के लिए अवसर का अनुकूलन करने के लिए विशेष ध्यान दिया जाता है. ये तैयारियाँ फ्लोरोसेंट और confocal माइक्रोस्कोपी के माध्यम से इमेजिंग के लिए उपयुक्त हैं. कुल मिलाकर, यह प्रक्रिया एक शक्तिशाली आनुवंशिक रूप से विनयशील मॉडल प्रणाली से दिल के संरचनात्मक विशेषताओं के सावधान और विस्तृत विश्लेषण के लिए अनुमति देता है.
Protocol
Discussion
यहाँ हम एक तैयारी और धुंधला ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर पृष्ठीय पोत और फ्लोरोसेंट या confocal माइक्रोस्कोपी के माध्यम से इमेजिंग के लिए जुड़े ऊतकों के लिए उपयोगी प्रोटोकॉल उपस्थित थे. हम से परिष्कृत और अध…
Acknowledgements
लेखकों एसआई Bernstein (सैन डिएगो स्टेट यूनिवर्सिटी) महत्वपूर्ण पढ़ने और इस पांडुलिपि की तैयारी के बारे में उपयोगी सुझाव के लिए धन्यवाद. यह काम एसआई Bernstein, SDSU, और आर Bodmer, BIMR NIH अनुदान द्वारा समर्थित था, और अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन के पश्चिमी राज्य संबद्ध से जी Vogler और ए Cammarato के लिए एक के बाद डॉक्टरेट फैलोशिप द्वारा.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich® | E4378 | |
| Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences Inc. | 50-00-0 | |
| Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich® | 9002-93-1 | |
| Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen™ | A12381 | |
| Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories, Inc. | H-1200 | |
| Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
Referências
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