عزل الحمض النووي الريبي من الجنينية التجميعي واسماك الزرد [كدنا] لتحليل الجينات
Summary
العزلة ذات جودة عالية ، RNA سليمة هو خطوة أساسية في بروتوكولات مختبر كثيرة. هنا ، علينا أن نظهر استخراج الحمض النووي الريبي من الأجنة الزرد كله والتوليف [كدنا] لاحقة في تطبيق إجراءات التجريبية المختلفة بما في ذلك التعبير الجيني التحليل ميكروأري.
Abstract
العديد من الإجراءات المختبرية هامة ومعقدة تتطلب مدخلات عالية من الحمض النووي الريبي ، ونوعية سليمة. ويمكن لعينة المتدهورة أو وجود شوائب تؤدي إلى نتائج كارثية في مجال التطبيقات التجريبية المصب. ومن ثم فهي ذات أهمية قصوى لاستخدام تقنيات متينة مع العديد من الضمانات والضوابط لمراقبة الجودة لضمان عينة متفوقة. هنا ، نحن من التفصيل على بروتوكول لعزل الحمض النووي الريبي من مجموع الأجنة الزرد بأكملها باستخدام ممسخ الكيميائية المتاحة تجاريا وتنظيف لاحقة لإزالة آثار الحمض النووي والشوائب باستخدام الحمض النووي الريبي عزلة تجارية عدة. كما RNA غير مستقر نسبيا ، وعرضة للانقسام بسهولة بواسطة RNAses ، ومعظم البروتوكولات التعبير الجيني فحص باستخدام المنتج الذي يتم تصنيعه [كدنا] مباشرة من قالب الحمض النووي الريبي. نحن من التفصيل إجراء لتحويل الحمض النووي الريبي في الناتج [كدنا] أكثر استقرارا استخدام عدة متاحة تجاريا. طوال هذه الإجراءات هناك العديد من الضوابط لمراقبة الجودة لضمان أن العينة ليست متدهورة أو ملوثة. المنتج النهائي من هذه البروتوكولات هو [كدنا] التي هي مناسبة لتحليل ميكروأري ، RT PCR أو تخزين طويل الأجل.
Protocol
Discussion
هشاشة جزيء الحمض النووي الريبي هو الاعتبار الأهم الذي ينبغي ألا يغيب عن البال طوال هذا البروتوكول. وينبغي دائما أن المعدات المعقمة ريبونوكلياز خالية تستخدم في منطقة خالية من ريبونوكلياز المختبر. ومن المفيد أن تحتفظ بجزء من المختبر لاستخدامها في إجراءات RNA فقط. يجب ر?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Glycogen (5 mg/ml) | Ambion | 9510 | ||
| NanoDrop ND-100 | Thermo Scientific | ND-1000 | ||
| Pellet Pestles with Microfuge Tube | VWR | KT749520-0090 | ||
| Phase Lock Gel Light, 1.5 ml | Eppendorf | 2302800 | ||
| Phenol, Tris-saturated | Roche Diagnostics | 3117944001 | ||
| RNAse Away | VWR | 17810-491 | ||
| RNAse-Free DNase Set | Qiagen | 79254 | ||
| RNEasy Mini Kit | Qiagen | 74104 | ||
| SuperScript® First-Strand Synthesis System for RT-PCR | Invitrogen | 11904-018 | ||
| TRIzol | Invitrogen | 15596-026 |
