एक इन विट्रो में FluoroBlok ट्यूमर आक्रमण परख
Summary
इस वीडियो यह दर्शाता है कि कैसे को मापने के लिए सेल संस्कृति एक प्रतिदीप्ति आधारित पद्धति का उपयोग आवेषण के माध्यम से सेल आक्रमण.
Abstract
metastatic कोशिकाओं की पहचान उनके तहखाने झिल्ली के माध्यम से आक्रमण और शरीर के अन्य भागों की ओर पलायन करने की क्षमता है. कक्ष दोनों छिपाना proteases कि नीचे तहखाने झिल्ली तोड़ के रूप में के रूप में अच्छी तरह से विस्थापित क्रम में आक्रामक होने के लिए सक्षम होना चाहिए. बी.डी. BioCoat ट्यूमर आक्रमण प्रणाली की स्थिति है कि उनके आक्रामक संपत्ति के मूल्यांकन की अनुमति के साथ कोशिकाओं को प्रदान करता है<em> इन विट्रो में</em<sup1,2></sup>. यह एक बी.डी. फाल्कन 24 multiwell FluoroBlok एक 8.0 माइक्रोन ताकना आकार पीईटी झिल्ली है कि समान बी.डी. Matrigel मैट्रिक्स के साथ लेपित किया गया है के साथ सम्मिलित प्लेट के होते हैं. बी.डी. Matrigel मैट्रिक्स की यह वर्दी परत एक पुनर्गठन तहखाने झिल्ली के रूप में कार्य करता है<em> इन विट्रो में</em> गैर इनवेसिव कोशिकाओं के लिए एक सच्चे बाधा प्रदान करते हुए एक उपयुक्त प्रोटीन संरचना आक्रमण अध्ययन पेश. कोटिंग प्रक्रिया की झिल्ली pores occludes, झिल्ली के माध्यम से पलायन से गैर इनवेसिव कोशिकाओं को अवरुद्ध. इसके विपरीत, आक्रामक कोशिकाओं के लिए खुद से अलग और लेपित झिल्ली के माध्यम से विस्थापित करने में सक्षम हैं. सेल आक्रमण की quantitation DiIC के रूप में एक फ्लोरोसेंट डाई के साथ या तो पूर्व या आक्रमण के बाद सेल लेबलिंग के द्वारा प्राप्त किया जा सकता है<sub12></sub> (3) या calcein AM, क्रमशः, और हमलावर कोशिकाओं के प्रतिदीप्ति मापने. बी.डी. FluoroBlok झिल्ली के बाद से प्रभावी ढंग से> 99% दक्षता पर 490-700 एनएम से प्रकाश के पारित होने के ब्लॉक, fluorescently लेबल कोशिकाओं है कि नहीं पर आक्रमण किया है एक नीचे पढ़ने प्रतिदीप्ति प्लेट पाठक से पता नहीं कर रहे हैं. हालांकि, कोशिकाओं है कि झिल्ली के नीचे करने के लिए आक्रमण किया है अब कोई प्रकाश स्रोत से परिरक्षित हैं और संबंधित प्लेट पाठक के साथ पाया. यह वीडियो एक endpoint सेल आक्रमण परख दर्शाता है, का उपयोग calcein आक्रमण कोशिकाओं का पता लगाने AM.
Protocol
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| BD BioCoat Tumor Invasion System | BD Biosciences | 354165 or 354166 | ||
| HT-1080 and NIH/3T3 cells | ATCC | |||
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM; serum-free) | ||||
| Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline, without calcium and magnesium (DPBS) | ||||
| BD Falcon FluoroBlok 24-Multiwell Insert System to be used as a cell migration control | BD Biosciences | 351157 or 351158 | ||
| 5% Fetal Bovine Serum in DMEM | ||||
| BD Calcein AM Fluorescent Dye | BD Biosciences | 354216 or 354217 | ||
| Hanks’ Balanced Salt Solution (HBSS) | ||||
| BD Falcon 24-well plates for post cell invasion labeling | BD Biosciences | 351147 | ||
| Fluorescence plate reader with bottom reading capabilities | PerkinElmer EnVision (R), TECAN Infinite (R), Molecular Devices SpectraMax (R), BioTek Synergy (TM), BMG LABTECH PHERAstar. |
Referências
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