Денатурирующих Мочевина полиакриламидном геле (мочевина PAGE)

Summary

Денатурирующих мочевины полиакриламидном геле используется для разделения одноцепочечных ДНК или РНК, до предела в 500 нуклеотидов. Карбамид в сочетании с тепло денатурации образцов и неструктурированных одной нити мигрировать в гель матрицы в зависимости от их молекулярного веса.

Abstract

СТРАНИЦА мочевины или денатурации мочевиной полиакриламидном геле работают 6-8 М мочевины, которая денатурирует вторичных ДНК или РНК, структурам и используется для их разделения в матрице полиакриламидном геле на основе молекулярной массой. Фрагменты от 2 до 500 баз, с длиной различия как малые, как одного нуклеотида, могут быть разделены с помощью этого метода ^1. Миграция образца зависит от выбранного акриламида концентрации. Высокий процент полиакриламидном решает нижняя молекулярных фрагментов весом. Сочетание мочевины и температуре 45-55 ° С в течение геля позволяет запустить для разделения неструктурированных ДНК или РНК молекул.

В целом этот метод, необходимые для анализа или очистки одноцепочечной ДНК или РНК фрагменты, например, синтезированные или меченых олигонуклеотидов или продуктов из ферментативных реакций расщепления.

В этом видео статье мы покажем, как подготовить и запустить денатурирующих гелях мочевины полиакриламида. Технические чаевые включены в дополнение к оригинальным ^1,2 протокола.

Protocol

Полный и подробный текст протокола для этой экспериментальной процедуры доступны в текущих протоколов в области молекулярной биологии. Подробная шаг за шагом инструкции по сборке гель бутерброд и гель для аппарата можно найти на веб-сайте BioRad 3. Необходимое обору…

Discussion

1. Группа резкости зависит от нескольких факторов. Объем выборки загружен для резких полос должна быть как можно меньше, то есть идеально между 1-5 мкл. Тем не менее, до 15 мкл может быть загружена который по-прежнему обеспечивает приемлемое разрешение. Менее объем пробы результаты в четкие полосы. </l…