एकल आण्विक परिसर Visualizing Vivo में उन्नत प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग
Summary
यहाँ हम बैक्टीरियल कोशिकाओं रहने के लिए कार्यात्मक आणविक परिसरों का पता लगाया जा करने के लिए, ट्रैक किए गए है और मात्रा निर्धारित सक्षम पर एकल अणु प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी के प्रदर्शन के लिए प्रोटोकॉल प्रदर्शित करता है.
Abstract
जीवित कोशिकाओं के तंत्र में पूर्ण अंतर्दृष्टि प्रमुख प्रक्रियाओं है कि प्रकाश में लाना और एक सेलुलर स्तर पर घटनाओं प्रत्यक्ष जांच से ही प्राप्त किया जा सकता है. जैविक प्रणालियों की कतरनी जटिलता को तारीख करने के लिए सटीक प्रयोग एकल अणु का कारण है अभी तक भी मांग हो सकता है, बजाय अपेक्षाकृत कच्चे तेल की थोक पहनावा औसत माप का उपयोग एकल सिस्टम के अध्ययन पर ध्यान केंद्रित. हालांकि, कई महत्वपूर्ण प्रक्रियाओं सिर्फ एक के स्तर पर जीवित कोशिका या कुछ अणुओं में पाए जाते हैं, पहनावा माप आम तौर पर इन घटनाओं के stochastic और विषम प्रकृति मुखौटा. यहाँ, उन्नत ऑप्टिकल माइक्रोस्कोपी और विश्लेषणात्मक छवि विश्लेषण उपकरण का उपयोग कर हम प्रदर्शन कैसे एकल अणुओं की एक सटीक करने के लिए एक एकल में रहने वाले बैक्टीरिया कोशिका और कैसे हम जैविक मशीनों के कामकाज में आणविक परिसरों के भीतर गतिशीलता का पालन कर सकते हैं के भीतर प्रोटीन की निगरानी करने के लिए. तकनीक सीधे प्रासंगिक physiologically हैं. वे न्यूनतम perturbative और जैविक नमूने के अध्ययन के तहत गैर इनवेसिव कर रहे हैं और पूरी तरह से रहने वाले सामग्री में जांच के लिए अभ्यस्त, बायोफिज़िक्स के अन्य एकल अणु दृष्टिकोण करने के लिए आसानी से उपलब्ध नहीं सुविधाएँ. इसके अलावा, जैविक नमूनों के अध्ययन का स्तर जो लगभग असंशोधित कक्ष ("जीनोमिक एन्कोडिंग") उपभेदों, के रूप में काफी अधिक प्रोटीन की तुलना में स्वाभाविक रूप से घटित होता पैदा करने के लिए और अधिक आम है, लेकिन कम आदर्श दृष्टिकोण करने का विरोध किया समान हैं पर सभी fluorescently टैग प्रोटीन का उत्पादन ('प्लाज्मिड अभिव्यक्ति'). इस प्रकार, जो जांच की जाएगी वास्तविक जैविक नमूने काफी प्राकृतिक जीवों के लिए करीब हैं, और इसलिए टिप्पणियों को और अधिक वास्तविक शारीरिक प्रक्रियाओं के लिए प्रासंगिक है.
Protocol
Discussion
देखभाल करने के लिए "अधिक कतरनी" सीमित बैक्टीरिया को देख के लिए इस के बाद से, सेल नहीं flagellar मोटर्स की कार्यक्षमता क्षीण कर सकते हैं लिया जाना चाहिए. यह महत्वपूर्ण है एक घंटे से ज्यादा समय के लिए कोशिकाओ?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम प्रो जूडिथ आर्मिटेज (ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय, ब्रिटेन) और प्रो. कॉनरोड Mullineaux (लंदन के क्वीन मैरी विश्वविद्यालय, ब्रिटेन) के समूहों से जीवाणु उपभेदों की तरह दान स्वीकार करते हैं. आईएमडी जैव रसायन विभाग (ऑक्सफोर्ड विश्वविद्यालय) और OCISB द्वारा संयुक्त रूप से वित्त पोषित है, एआर एक इंजीनियरिंग और शारीरिक विज्ञान अनुसंधान परिषद (EPSRC) डीटीसी छात्रावस्था के द्वारा वित्त पोषित है, एनडी जैव प्रौद्योगिकी और जैव विज्ञान अनुसंधान परिषद (बीबीएसआरसी) से वित्त पोषित है, एमसीएल है रॉयल सोसायटी विश्वविद्यालय के अनुसंधान फैलोशिप द्वारा वित्त पोषित है.
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