単一分子複合体の可視化インビボでの高度な蛍光顕微鏡を用いて
Summary
ここでは、機能性分子複合体を追跡し、定量、検出できるようにするために細菌細胞を生きて単一分子蛍光顕微鏡を実行するためのプロトコルを示す。
Abstract
生きた細胞のメカニズムへの完全な洞察は、細胞レベルでの事象を惹起し、ダイレクトキープロセスを調べることによってのみ達成することができます。生物系のせん断複雑さをこれまでには、代わりに相対的に原油バルクアンサンブル平均測定を使用して単一システムの研究に焦点を当て、あまりにも要求される正確な単一分子実験を引き起こしている。しかし、多くの重要なプロセスは一つのレベルで生きている細胞や少数の分子で起こる、アンサンブルの測定値は、一般的にこれらのイベントの確率と異種の性質を覆い隠す。ここでは、高度な光学顕微鏡と我々は、単一の分子とどのように我々は生物学的機械の機能に分子複合体内動態を観察できるの精度への単一の生きた細菌細胞内のタンパク質を監視する方法を示す分析画像解析ツールを使用して。テクニックは、生理学的に直接関連しています。彼らが検討されて生体試料に最小限の摂動と非侵襲的であり、完全に生体を構成する物質の調査、生物物理学の他の単一分子のアプローチが容易に利用できない機能に同調されています。さらに、生物学的標本は、すべて自然に発生するよりもはるかに多くのタンパク質を生成するための、より一般的ですが、理想的なアプローチとは対照的に変更されていない細胞株（"ゲノムエンコード"）とほとんど同一のレベルで、少なくとも蛍光タグタンパク質を生成する研究（"発現プラスミド"）。このように、調査される実際の生物学的サンプルは、自然の生物にかなり近いですので、実際の生理学的プロセスへの観察は、より関連性の高い。
Protocol
Discussion
これは、べん毛モーターの機能を損なうおそれがあるので注意が、つながれた細菌を調べるための細胞"せん断を介して"しないように注意する必要があります。彼らは酸素枯渇になる可能性があるので、顕微鏡スライド上に、1時間に1回よりもはるかに長いためにセルを使用することが重要です。かなりの最適化は、最適な顕微鏡の撮像条件が検討され、特定の生物学的システムへの?…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我々は教授ジュディスアーミテージ（オックスフォード大学、英国）と教授コンラッドMullineaux（ロンドンのクイーンメアリー大学、英国）のグループから、菌株の種類の寄付を認める。 IMDは、共同で生化学の部門（オックスフォード大学）とOCISBによって資金を供給され、ARは、工学物理科学研究評議会（EPSRC）DTCの学生の身分によって資金を供給され、NDは、バイオテクノロジーおよび生物科学研究会議（BBSRC）から資金提供され、MCLは王立協会大学研究フェローシップによって資金を供給。
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