Хромосомные Подготовка распространения человеческих эмбриональных стволовых клеток для Кариотипирование
Summary
Кариотипирование представляет собой простой и полезный метод широко используется для обнаружения генетических изменений. Здесь мы опишем шаг за шагом протокол для распространения хромосомы подготовки человеческих эмбриональных стволовых клеток для мониторинга хромосомной статуса этих клеток поддерживается в культуре.
Abstract
Хотя человеческие эмбриональные стволовые клетки (чЭСК) было показано, что нынешний стабильный кариотип диплоидных 1, многие исследования показали, что в зависимости от условий культивирования они становятся склонны к приобретению хромосомные аномалии, такие как сложение целых или части хромосом. Действительно, при длительном культуры, кариотипическая изменения наблюдаются при ферментативных или химических диссоциации используются 2,3,4, в то время как руководство рассечение колонии для пассирования сохраняет стабильный кариотип 5. Кроме того, изменения в окружающей среде, такие как удаление фидерных клеток также, кажется, идти на компромисс генетической целостности чЭСК 3,6. Как только хромосомные изменения могут повлиять на клеточной физиологии, характеристику генетической целостности чЭСК в пробирке важно учитывая чЭСК в качестве важнейшего инструмента в эмбриогенезе исследования и проверки на наркотики. Кроме того, для будущих терапевтических целях хромосомные изменения реальной проблемой, как это часто связано с канцерогенеза.
Здесь мы показываем, простой и удобный метод для получения высоких спрэдах хромосомы качества для последующего анализа хромосомного набора от G-полосы, FISH, SKY или CGH методы 7,8. Мы рекомендуем проверять хромосомных статус регулярно с интервалом в 5 проходов в целях контроля за появлением транслокации и анеуплоидии
Priscila Бритто и Рафаэла Sartore способствовали в равной степени к бумаге.
Protocol
Discussion
Подготовка хромосомы распространяется очень важный шаг для успешного анализа генетического статуса эмбриональных стволовых клеток на регулярной методы, как G-полосы, и более сложные методы, такие как рыбы, и SKY CGH.
Эта процедура может быть применена для многих типов клет…
Declarações
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 15 ml centrifuge tube | TPP | 91015 | ||
| Colcemid Karyo MAX | Gibco | 15212-012 | ||
| EDTA | Isofar | 721 | ||
| Glacial acetic acid | Isofar | 100 | ||
| Methanol | Isofar | 208 | ||
| Potassium Chloride (KCl) | Merck | 104.931.000 | ||
| Slide | Bioslide | 7105-1 | ||
| Tripsin | SIGMA | T4799 |
Referências
- Thomson, J. A. Embryonic stem cell lines derived from human blastocysts. Science. 282 (5391), 1145-1145 (1998).
- Draper, J. S. Recurrent gain of chromosomes 17q and 12 in cultured human embryonic stem cells. Nat Biotechnol. 22 (1), 53-53 (2004).
- Maitra, A. Genomic alterations in cultured human embryonic stem cells. Nat Genet. 37 (10), 1099-1099 (2005).
- Mitalipova, M. M. Preserving the genetic integrity of human embryonic stem cells. Nat Biotechnol. 23 (1), 19-19 (2005).
- Buzzard, J. J., Gough, N. M., Crook, J. M., Colman, A. Karyotype of human ES cells during extended culture. Nat Biotechnol. 22 (4), 381-381 (2004).
- Caisander, G. Chromosomal integrity maintained in five human embryonic stem cell lines after prolonged in vitro culture. Chromosome Res. 14 (2), 131-131 (2006).
- Imreh, M. P. In vitro culture conditions favoring selection of chromosomal abnormalities in human ES cells. J Cell Biochem. 99 (2), 508-508 (2006).
- Robin-Wesselschmidt, J. L., Loring, J. F., Robin-Wesselschmidt, J. L., Robin-Wesselschmidt, S. c. h. w. a. r. t. z. . Human Stem Cell Manual. , 59-59 (2007).
- Rooney, D. E. . Human Cytogenetics. , (2001).
- Heslop-Harrison, P., Schwarzacher, T., Heslop-Harrison, P., Schwarzacher, T. . Practical in situ hybridization. , 51-51 (2000).
