والتقييم الكمي لاستخدام الطيف Lipidome الخميرة Electrospray قداس التأين
Summary
نحن تصف طريقة جديدة lipidomics كمي لتحديد الأنواع الدهنية عديدة في الخميرة باستخدام المسح المسح الشامل التأين مطياف electrospray (ESI / MS). هذا الأسلوب يتجاوز حاليا الأساليب المتاحة لتحديد وتقدير الدهون في القدرة على حل مختلف أشكال الجزيئية من الدهون ، والحساسية ، والسرعة.
Abstract
الدهون هي واحدة من الفئات الكبرى من الجزيئات الحيوية والديناميكية أدوارا الغشاء ، وتخزين الطاقة ، والإشارات<sup> 1-4</sup>. الخميرة في مهدها<em> السكيراء الجعوية</em> وراثيا وكيميائيا حقيقي النواة وحيدة الخلية تلاعب مع الجينوم المشروح وlipidome بسيط جدا ، هو نموذج لدراسة قيمة الوظائف البيولوجية للأنواع الدهون المختلفة في حقيقيات النوى متعددة الخلايا<sup> 2،3،5</sup>.<em> س. خميرة</em> لديه 10 فئات رئيسية من الدهون مع أطوال سلسلة من ذرات الكربون اساسا 16 أو 18 وإما صفر أو واحد من درجة التشبع<sup> 6،7</sup>. وراسخة ولكن حساسية منخفضة ، منفصلة كاف أشكال مختلفة من الدهون الجزيئية ، تتطلب derivitization الدهون السابقة — الأساليب القائمة لتحديد وتقدير الدهن — مثل ارتفاع الأداء اللوني السائل ، اللوني رقيقة الطبقة ، المجهري مضان ، واللوني للغاز تليها MS للتحليل ، أو يمكن أن تستهلك الوقت تماما. هنا نقدم وصفا مفصلا لنهجنا التجريبية لحل هذه القيود المتأصلة باستخدام المسح المسح ESI / MS لتحديد النوعي والكمي لتكملة كاملة من الدهون في خلايا الخميرة. وصف الأسلوب لا يتطلب الفصل الكروماتوغرافي مخاليط معقدة الدهون المستخرجة من خلايا الخميرة ، وبالتالي تسارع إلى حد كبير عملية جمع البيانات. هذا الأسلوب يتيح تحديد وتقدير الدهون في تركيزات منخفضة بقدر مل / غ وأنها طبقت بنجاح لتقييم lipidomes من خلايا الخميرة كلها وعلى تنقية العضيات. استخراج الدهون من خلايا الخميرة كلها لاستخدام هذا الأسلوب من تحليل الدهون تستغرق ساعتين الى ثلاث ساعات. يستغرق سوى خمس إلى عشر دقائق لتشغيل كل عينة من الدهون المستخرجة ويجفف على مطياف الكتلة Q – TOF مجهزة مصدر نانو electrospray.
Protocol
Discussion
هذا الأسلوب يتيح تقييم سريع الكمي للlipidome باستخدام الخميرة متاحة بسهولة ، ومواد غير مكلفة. الأسلوب يسمح تحديد معظم أنواع الدهون الموجودة في خلايا الخميرة باستثناء diacylglycerols ، واسترات ergosterols ergosteryl ، وإن كان يمكن تحديد هذه الدهون عن طريق استبدال هيدروكسيد الأمونيوم مع ه…
Acknowledgements
ونحن ممتنون لتيسييه آلان لتقديم المشورة القيمة والمناقشات ، والدعم التقني. نعترف مركز للتطبيقات البيولوجية للالطيف الكتلي في جامعة كونكورديا للخدمات متميزة. وأيد هذا العمل من المنح المقدمة من CIHR NSERC وكندا. فيتامين هو محقق جديد CIHR وكرسي أبحاث جامعة كونكورديا في علم الجينوم ، بيولوجيا الخلية والشيخوخة.
Referências
- Cao, H., Gerhold, K., Mayers, J. R., Wiest, M. M., Watkins, S. M., Hotamisligil, G. S. Identification of a lipokine, a lipid hormone linking adipose tissue to systemic metabolism. Cell. 134, 933-944 (2008).
- Claypool, S. M., Oktay, Y., Boontheung, P., Loo, J. A., Koehler, C. M. Cardiolipin defines the interactome of the major ADP/ATP carrier protein of the mitochondrial inner membrane. J. Cell Biol. 182, 937-950 (2008).
- Guo, T., Gregg, C., Boukh-Viner, T., Kyryakov, P., Goldberg, A., Bourque, S., Banu, F., Haile, S., Milijevic, S., San, K. H. A signal from inside the peroxisome initiates its division by promoting the remodeling of the peroxisomal membrane. J. Cell Biol. 177, 289-303 (2007).
- Russell, S. J., Kahn, C. R. Endocrine regulation of ageing. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 8, 681-691 (2007).
- Czabany, T., Athenstaedt, K., Daum, G. Synthesis, storage and degradation of neutral lipids in yeast. Biochim. Biophys. Acta. 1771, 299-309 (2007).
- Brü, g. g. e. r., Erben, B., Sandhoff, G., Wieland, R., &, F. T., Lehmann, W. D. Quantitative analysis of biological membrane lipids at the low picomole level by nano-electrospray ionization tandem mass spectroscopy. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 94, 2339-2344 (1997).
- Schneiter, R., Brügger, B., Sandhoff, R., Zellnig, G., Leber, A., Lampl, M., Athenstaedt, K., Hrastnik, C., Eder, S., Daum, G. Electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS) analysis of the lipid molecular species composition of yeast subcellular membranes reveals acyl chain-based sorting/remodeling of distinct molecular species en route to the plasma membrane. J. Cell Biol. 146, 741-754 (1999).
- Bligh, E. G., Dyer, W. J. A rapid method of total lipid extraction and purification. Can. J. Biochem. Physiol. 37, 911-917 (1959).
