Endotel progenitör hücrelerin koloni oluşturan (ECFCs) vasküler homeostazı ve onarım çalışması için bir gelecek vaat eden bir araçtır.<sup> 1,2</sup> Bu kağıt, izolasyon ve anti-sığır aşılama riski azalan toplanmış insan trombosit lizatı (pHPL) heparinli yetişkin insan periferik kan ECFC genişlemesi için bir roman hayvan-serum ücretsiz bir yöntem.
Abstract
Bu kağıt heparinize gelen endotel progenitör hücrelerin koloni oluşturan (ECFCs) için yeni bir kurtarma stratejisi tanıttı ama aksi takdirde ortalama 12 gün içinde yetişkin insan periferik kan unmanipulated. > 1×10 8 ECFCs büyük ölçekli bir genişleme sonra, daha ileri testler için elde edilebilir. Avantajlı pHPL ile sığır serum antijenleri ile insan hücrelerinin kişi hariç tutulabilir. Akım sitometri ve immünohistokimyasal olarak izole hücreler ECFC ve in vitro işlevselliği gibi vasküler yapılar oluşturmak için bir matrigel tayininde test edilebilir olarak karakterize edilebilir . Ayrıca bu hücrelerin subkutan bir fare modelinde in vivo olarak fonksiyonel, perfüze damarları oluşturmak için enjekte edilebilir. Uzun vadeli büyüme ve kriyoprezervasyon çoğalması sonra, fonksiyon ve genomik istikrar korunmuş gibi görünüyor. 3,4
Bu hayvansal protein izolasyonu ve genişleme yöntemi ECFCs bir büyük miktarda üretmek için kolay uygulanabilir.
Protocol
A.) ECFC ISOLATON 1. GÜN: Deney başlamadan önce, hücre kültür ortamı Endotel Büyüme Orta-2 (EGM-2) hazırlar. (Sigma, St Louis, MO 500ml Endotel Bazal heparin (1000 U / ml 1 ml) ile Orta-2, 5ml 100x çözüm penisilin / streptomisin Ek www.sigmaaldrich.com ), L-glutamin (2 mM nihai konsantrasyonu ) ve 50 ml toplanmış insan trombosit lizatı (pHPL). Ardından 0.2 ml hidrokortizon, 2 ml hFGF-B, 0.5 ml VEGF, 0.5 ml EGF, 0.5 ml IGF-1 …
Discussion
Bu roman izolasyon ve genişleme yöntemi, daha verimli ve daha az zaman alıcı ve herhangi bir hücre ayırma herhangi bir yoğunluk gradiyenti (gerekli) kaçınarak, geleneksel yöntemlere göre daha daha az pahalı bir basit ve verimli bir süreç. Büyükbaş antijen ve varsayılan sonraki xenoimmunization pHPL temas kullanarak dışındadır. Kültür dönemde küçük pıhtıları pHPL neden oluşturabilir. Tecrübelerimize dayanarak bu pıhtıları koloni oluşumu ve hücre çoğalması veya fonksiyon etkisi yok…
Acknowledgements
Yazarlar, mükemmel teknik destek için pHPL ve Margaretha Frühwirth ve Daniela Thaler sağlamak için Dr. Katharina Schallmoser teşekkür ederim.
Hofmann, N. A., Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells. J. Vis. Exp. (32), e1524, doi:10.3791/1524 (2009).