हम मानव दैहिक lentivirus मानव कारकों Oct4, Sox2, Nanog, और Lin28 की डिलीवरी की मध्यस्थता का उपयोग कोशिकाओं से प्रेरित pluripotent स्टेम सेल की पीढ़ी के लिए प्रोटोकॉल प्रदर्शित करता है. Pluripotency आकारिकी और भ्रूण स्टेम सेल (ते) विशिष्ट मार्करों की उपस्थिति द्वारा पुष्टि की गई.
2006 में, Yamanaka और उनके सहयोगियों ने पहली बार दिखा दिया है कि retrovirus की मध्यस्थता वितरण और Oct4 की अभिव्यक्ति, Sox2, सी Myc और Klf4 माउस fibroblasts में pluripotent राज्य उत्प्रेरण के लिए सक्षम है 1 एक ही समूह भी मानव दैहिक कोशिकाओं के सफल reprogramming में रिपोर्ट प्रेरित pluripotent स्टेम (आईपीएस) के एक ही प्रतिलेखन रेट्रोवायरल वैक्टर द्वारा दिया कारकों के मानव संस्करणों का उपयोग कोशिकाओं. 2 इसके अलावा, जेम्स थॉमसन एट अल. रिपोर्ट है कि lentivirus की मध्यस्थता सह कारकों का एक और सेट की अभिव्यक्ति (Oct4, Sox2, Nanog और Lin28 ) आईपीएस कोशिकाओं में मानव दैहिक कोशिकाओं reprogramming करने में सक्षम था 3.
आईपीएस कोशिकाओं आकारिकी, प्रसार, और शरीर के सभी प्रकार के ऊतकों में अंतर करने की क्षमता में ES कोशिकाओं के लिए इसी तरह की हैं. मानव आईपीएस कोशिकाओं ES कोशिकाओं पर एक विशिष्ट लाभ है के रूप में वे भ्रूण विनाश के नैतिक दुविधा बिना ES कोशिकाओं के प्रमुख गुण एक्ज़िबिट है. रोगी विशेष के आईपीएस कोशिकाओं की पीढ़ी गैर ऑटोलॉगस प्रतिरोपित कोशिकाओं की प्रतिरक्षा अस्वीकृति के लिए क्षमता को नष्ट करने से व्यक्तिगत पुनर्योजी चिकित्सा उपचार के लिए एक महत्वपूर्ण अंधी गली circumvents.
यहाँ हम Stemgent मानव TF lentivirus सेट का उपयोग मानव fibroblast कोशिकाओं reprogramming के लिए प्रोटोकॉल का प्रदर्शन. हम यह भी पता चलता है कि इस सेट के साथ reprogrammed कोशिकाओं आकारिकी चार पोस्ट पारगमन दिनों आईपीएस को दिखाने के लिए शुरू. Stemolecule Y27632 का प्रयोग, हम कॉलोनी के तीन अनुक्रमिक दौर उठा और passaging के बाद आईपीएस कोशिकाओं और मनाया सही आकारिकी के लिए चुना है. हम यह भी दिखाना है कि बाद reprogramming कोशिकाओं pluripotency मार्कर एपी, टीआरए-1-81 सतह मार्करों, टीआरए-1-60, SSEA 4, और SSEA-3, और परमाणु मार्करों Oct4, Sox2 और Nanog प्रदर्शित.
इन परिणामों दिखाना है कि Stemgent मानव TF lentivirus सेट करने के लिए कुशलतापूर्वक के अस्थानिक अभिव्यक्ति उत्प्रेरण द्वारा आईपीएस कालोनियों उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है मानव fibroblasts में प्रतिलेखन कारकों transduced. जब reprogramming प्रयोगों डिजाइन, कई चर reprogramming की दक्षता का अनुकूलन करने के लिए विचार किया जाना चाहिए. सबसे पहले, सक्रिय वायरस के लिए लक्ष्य अनुपात (MOI संक्रमण की बहुलता) प्राथमिक पारगमन के लिए इष्टतम पारगमन दक्षता प्राप्त करने के कदम के दौरान संशोधित किया जा आवश्यकता हो सकती है. दूसरा, लक्ष्य कोशिकाओं के विकास की स्थिति reprogramming को प्रभावित कर सकता है. स्वस्थ और proliferative कोशिकाओं reprogramming करने के लिए उत्तरदायी हैं. तीसरा, जब अलग सेल नंबर के लिए प्रोटोकॉल को संशोधित, यह अनुशंसा की जाती है कि लक्ष्य कक्ष संख्या आनुपातिक संस्कृति डिश की सतह क्षेत्र के लिए समायोजित किया जा. अन्त में, Y27632 रूप में लागू करने रॉक inhibitors के रूप में हाल ही के अध्ययन को बढ़ाने HES कॉलोनी अस्तित्व में इसकी उपयोगिता का प्रदर्शन किया है सफल reprogramming सुनिश्चित करने में मदद के लिए माना जाता है होना चाहिए 4,5.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Human TF Lentivirus Set | Stemgent | 00-0005 | ||
Stemolecule Y27632 | Stemgent | 04-0012 | ||
TRA-1-81 antibody | Stemgent | 09-0012 | ||
TRA-1-60 antibody | Stemgent | 09-0009 | ||
SSEA-4 antibody | Stemgent | 09-0003 | ||
SSEA-3 antibody | Stemgent | 09-0014 |