大動脈リングアッセイ

Summary

血管新生は、既存の血管か​​らの血管の出芽は、自然および病理学的プロセスの両方に関連付けられています。ここでは、血管新生増強と阻害剤が直接文化の大動脈輪に追加できる大動脈リングアッセイを示す。発芽しneovessel伸長は6-12日の期間にわたって大動脈リングを調べることによって決定することができます。

Abstract

血管新生は、既存の血管か​​ら血管の発芽は、自然および病理学的プロセスの両方に関連付けられています。様々な血管新生アッセイは、培養条件（1）の個々の内皮細胞の研究を含む。大動脈リングアッセイは、器官培養に基づいている血管新生モデルです。このアッセイでは、血管新生血管は、大動脈のセグメント（（2）から変更）から成長する。簡単に言えば、マウス胸部大動脈を摘出され、脂肪層と外膜が除去され、リングの長さは1mm程度が用意されています。個々のリングはその後48ウェルプレートの各ウェルの内部にキャスト、地下の行列のエキスの小さな固体ドーム（BME）に埋め込まれています。血管新生因子と血管新生の阻害剤は、直接リングに追加することができます、そして大動脈リングおよび他の細胞型の混合共培養は、パラクリン血管新生効果の研究に用いることができる。発芽は6-12日の期間にわたって実体顕微鏡下で検査により観察される。大動脈セグメントの不規則性によって引き起こされる大規模な変化が原因で、6 plicatesで実験することが強く推奨されます。 Neovesselの伸長は、位相差顕微鏡を用いて実験し、画像化された全体に監視され、そして上清を、関連する血管新生および抗血管新生因子、細胞死のマーカーと亜硝酸の測定のために収集されます。

Protocol

実験前日： BMEは（減少成長因子、Cultrex、Trevigen）氷上または4℃で解凍できるよう℃、一度、再固化を防止するために氷上で維持解凍した。 実験日： マウスは（6-7週齢）を麻酔されると外出血。 冷滅菌PBSで満たしたシャーレに胸部大動脈を削除します。 脂肪組織の周囲からの機械的なクリーニングを行います。いつでも、大動脈の乾燥…

Discussion

大動脈リングアッセイは、血管新生だけでなく、抗血管新生因子を評価する方法に関する有益なツールです。彼らは生体内で neovesselsに解剖学的に類似していることを意味し、内皮細胞のチューブに関連付ける大動脈輪募集平滑筋細胞および周皮細胞から成長する船。さらに、マウスの大動脈リングアッセイは、この種で使用可能なトランスジェニックツールの広大な配列の利点を保?…