Os autores não têm nada a divulgar.

eletroforese em gel de gradiente desnaturante (dgge)

Eletroforese em Gel de gradiente desnaturante (DGGE)

Olá, meu nome é Celeste Peterson e sou bolsista da Universidade de Harvard estudando comunidades de biofilmes microbianos. Portanto, estou traçando o perfil das comunidades bacterianas observando sua sequência de 60 N e como essa sequência muda ao longo do tempo no espaço. E para fazer isso, estou usando o DDGE.Este não é um acry normal do meu poço, ele precisa ser mantido a 60 graus quando é executado e o buffer precisa ser bombeado continuamente. Então, vamos aquecer o buffer por cerca de uma hora até que esteja a 60 graus, e então podemos passar a toalha. Agora vou lavar este prato com solução diluída de uc, descascando em busca de impurezas, e um, acenda-o.Qualquer coisa assim pode causar regularidades. É importante limpar toda a água. Então, quando eu montar o gel, colocarei esse chip do lado de fora do gel.Portanto, o gel ficará entre esses dois pedaços de vidro e o chip ficará do lado de fora e não afetará o gel no meio. Então, agora vou montar o gel nesses grampos e depois apertá-los e apertá-los girando para a direita. Como acontece com qualquer gel, é importante certificar-se de que o fundo esteja nivelado.Para evitar a fabricação, agora viramos o gel e o colocamos aqui para ser selado com a junta. Portanto, é importante quando você faz isso que o gel, que as placas estejam realmente alinhadas com a junta aqui. Então, esses botões na lateral entram e você pressiona para digitar o selo.Portanto, esta é uma seringa de 30 mil. E essa parte e essa parte vêm com o kit bio vermelho e assim por diante. E isso é apenas para se livrar do excesso de água nos tubos.Portanto, coloque o tubo no gel para carregar o gel. Primeiro você coloca um adaptador no tubo e, em seguida, uma agulha olha com aquele pequeno adaptador e o coloca bem no centro do gel, para que fique bem abaixo do vidro inferior. Em seguida, esse adaptador de fio vai para o tubo longo e se conecta a seringas iguais contendo a solução de alta e baixa densidade.Portanto, essas são soluções pré-preparadas. O azul, eu adicionei um corante aqui que apenas indica que esta é a solução mais desnaturante e esta é a solução de trem menos adequada, a de baixa densidade. E eles têm tudo neles.E agora eu vou fazer, vou ser Na verdade, eu dobro da semana. E uma vez que você tenha a tentação, você tem cerca de cinco a sete minutos para encher o gel antes que o cólon suba. E agora enchemos o suco da seringa com a solução.Então, vou preenchê-lo com cerca de 15 a solução. E então, para me livrar de qualquer bolha de ar, vou virá-la de cabeça para baixo e apertar suavemente até que a bolha de ar superior desapareça. Agora, esse pequeno parafuso aqui vai entrar nesse sulco.Este adaptador vai se alinhar com esse grampo aqui, e vai ficar C preso com muita força. E então esse tubo vai se conectar à seringa. E a mesma coisa é feita do outro lado com a matriz de alta densidade, onde é hora de entregar.E então eu vou girar essa roda em um movimento constante no sentido horário. E primeiro a solução azul vai sair primeiro porque é a mais na natureza, e vai formar a parte inferior do gel. E depois de um tempo, a solução transparente começará a preencher o gel e o gradiente será formado.Um momento é o suavemente em um ângulo para E assim que você terminar de derramar o gel para lavar seus tubos imediatamente porque eles vão polimerizar Indo, é o grupo lá. E então pressione para baixo. Então, este pouco, e do outro lado, farei a mesma coisa. Okey.Olá, meu nome é Celeste Peterson e sou bolsista da Universidade de Harvard estudando comunidades biológicas microbianas. Então, estou traçando o perfil das comunidades bacterianas observando sua sequência 60 F e como a sequência muda ao longo do tempo no espaço. E para fazer isso, estou usando o DDGE.Portanto, DGE é eletroforese em gel Dena. E basicamente a ideia é que há um gradiente e o DNA, à medida que desce pelo gradiente, fica desnaturado. E assim diferentes 16 espécies vão parar em diferentes pontos ao longo do gradiente.E assim acaba sendo uma impressão digital das diferentes espécies de sensualidade na comunidade. Portanto, o objetivo do meu experimento é ver quem está na comunidade e como isso está mudando ao longo do tempo e do espaço. E eu posso usar o gel DDD de sensualidade e então posso cortar as faixas e identificar as espécies que estão representadas em cada comunidade.Portanto, um dos maiores problemas ao fazer um gel DDG é descobrir o gradiente que é o melhor. E isso é apenas algo que precisa ser brincado e descobrir para uma comunidade específica que tipo de gradiente. Então, o que estou usando hoje é de 35 a 55% de ureia.Um dos grandes problemas que podem acontecer com essa técnica é que as manchas surgem nas inclinações. E descobri que, por qualquer motivo, uma das melhores coisas a fazer é deixar os géis passar os géis por muito tempo e depois os esfregaços desaparecem. Bem, hoje estou usando apenas para comunidades bacterianas em geral, mas isso também pode ser usado para uma família específica de bactérias para ver como elas mudam com o tempo, e tendem a ser géis muito limpos.Você também pode observar mutações em genes únicos com DDGE.

Eletroforese em Gel de gradiente desnaturante (DGGE)

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