Retro-Orbital-Injection in Adult Zebrafisch

Summary

Hier zeigen wir, wie retro-orbitalen Injektion bei erwachsenen Zebrafisch zu tun.

Abstract

Die medikamentöse Behandlung von ganzen Tieren ist ein wichtiges Instrument in jedem Modell für pharmakologische und chemische genetische Studien. Die intravenöse (iv) Injektion ist oft das wirksamste und nicht-invasive Form der Lieferung eines Agenten von Interesse. In der Zebrafisch (<em> Danio rerio</em>) Hat iv Injektion von Medikamenten lange eine Herausforderung, weil der kleine Gefäßdurchmesser worden. Dies hat auch eine wesentliche Hürde für die Injektion von Zellen während der hämatopoetischen Stammzelltransplantation unter Beweis gestellt. In der Vergangenheit wurden Injektionen in die Blutbahn direkt durch das Herz getan. Allerdings hat diese intrakardiale Verfahren eine sehr hohe Sterblichkeitsrate als das Herz ist oft während der Injektion verlassen die Fische anfälliger für Infektionen, massive Blutverlust oder tödliche Organschäden punktiert. Aufbauend auf unserer Erfahrung mit der Maus, haben wir ein neues Injektionsverfahren im Zebrafisch, in denen der Injektionsstelle ist hinter dem Auge und in den retro-orbitalen venösen Sinus entwickelt. Dieses Retro-Orbital (RO) Injektionstechnik wurde erfolgreich sowohl in der Injektion von Medikamenten in der erwachsenen Fische sowie die Transplantation von Knochenmarkzellen gesamte Niere beschäftigt. RO Injektion hat eine viel geringere Sterblichkeit als bei herkömmlichen intrakardiale Injektion. Fische, die retroorbital injiziert werden tendenziell weniger nach der Injektion bluten und sind auf einem viel niedrigeren Risiko von Verletzungen zu einem wichtigen Organ wie das Herz. Ferner wird, wenn richtig durchgeführt, injizierten Zellen und / oder Drogen schnell in die Blutbahn ermöglicht Verbindungen auf ihre Wirkung auf den gesamten Fisch-und Nierenzellen ausüben zu Hause einfach an ihre Nische. So minimiert die neue Injektionstechnik Sterblichkeit und ermöglicht effiziente Bereitstellung von Material in die Blutbahn des erwachsenen Fischen. Hier haben wir beispielhaft für diese Technik durch retro-orbitale Injektion von Tg (<em> Globin</em>: GFP)-Zellen in das Erwachsenenleben<em> Casper</em> Fisch sowie Injektion von einem roten Fluoreszenzfarbstoff (Dextran, Texas Red<em></em>) In das Erwachsenenleben<em> Casper</em> Fisch. Wir haben dann visualisieren erfolgreichen Injektionen von ganzen Tier Fluoreszenzmikroskopie.

Protocol

Teil 1. Vorbereitung von Injektionsmaterial Tg (Globin: GFP)-Zellen: Bleed erwachsenen Spenders Fisch mit 10ul Pipettenspitze in Heparin (1unit/ul) zu punktieren Fisch hinter gill beschichtet. Absaugen roten Blutkörperchen und verzichten in der Zelle Puffer (0.9X PBS + 5% FBS + 1% Pen / Strep). Filter Zellsuspension über 40um Mesh und bestimmen Konzentration von Zellen mit Hämozytometer wie zuvor von LeBlanc et al. Spin nach unten und resuspendieren in Zell-…

Discussion

Retro-Orbital-Injektion bei erwachsenen Zebrafisch gibt die höchste Effizienz der Lieferung von injizierten Materials in die Blutbahn mit der niedrigsten Inzidenz der Mortalität. Aufgrund der Art der Einspritzung, taucht der Einstichstelle, schnell zu heilen, sinkende das Auftreten von Infektionen und Menge des Blutverlustes. Die Website kann auch wiederholt während einer kurzen Zeit für die tägliche Injektionen von Drogen injiziert werden, zum Beispiel.

Große Mengen von Drogen ist fü…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa		Sigma-Aldrich	2106	Preweighed vial of 300 USP units
Tricaine-S		Western Chemical		MS-222
Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline		Invitrogen	14190-144
Dextran, Texas Red®		Molecular Probes Inc.	D1830
E3				5mM NaCl 0.17 mM Kcl 0.33 mM CaCl2 0.33 mM MgSO2
Microliter Syringe		Hamilton	80300	701N 10uL SYR (26s/2”/2)