Автоматизированные микрожидкостных Прибор был разработан для циркуляции зарождаются обогащения клетка из периферической крови через лизис эритроцитов, что обеспечивает изоляцию высокого качества образцов без потерю клеток.
Abstract
В этом докладе протокол для автоматизированного микрожидкостных устройств лизиса крови подробно. Циркуляционные ядерных клеток (ЧПУ), в том числе лейкоцитов и эндотелиальных клеток, обеспечивают идеальную платформу для обновления статуса на иммунную состояние человека. Микрожидкостных протокол позволяет для обогащения ЧПУ без селективной потери клеток и подготовки проб изменчивости в связи с пользователем опосредованного действия. Короче говоря, протокол включает устройство изготовление, пробы, устройство установки и запуска крови через микрожидкостных камеры. В устройстве цельной крови быстро смешать с деионизированной водой в течение примерно 10 секунд в 50 мкм х 150 микрон микрожидкостных каналов. В этом промежуток времени эритроциты лизируются вследствие гипотонического условиях. Елочка структур на дно канала обеспечить тщательное перемешивание и экспозиция клеток к постоянной среды. Оставшиеся клетки возвращаются в изотоническом условия на выходе из устройства, фиксируется с помощью 2% параформальдегида, центрифугируют для отдельных эритроцитов мусор с ЧПУ, а также взвешенные в потоке буфера для окрашивания и анализ с помощью проточной цитометрии. Результаты показывают, чистой проточной цитометрии разброс участков с населением ЧПУ сохранены. Значение этого устройства и вступления протокола в изучении и понимании патогенеза заболевания путем анализа населения с ЧПУ. Таким образом, автоматизация, эффективность и простота микрожидкостных протокола продемонстрирована.
Protocol
Часть 1. Микрожидкостных изготовления устройства Формы кремния мастер микрожидкостных устройств лизиса была создана с использованием стандартных методов фотолитографии с оборудованием в Университете Луисвилля чистых помещений [1]. AutoCAD (Autodesk, Inc, Сан-Рафаэль, Калифорния)…
Discussion
Автоматизированные микрожидкостных протокол лизиса крови не поступало. В рамках протокола критических шагов стоит упомянуть. В разделе п.2.1, важно, чтобы отменить первый флакон крови, взятой в качестве образца содержит выбили зрелые эндотелиальные клетки, выступая в качестве ложных с?…
Acknowledgements
Исследования были поддержаны Уоллес H. Coulter Фонд Рано премии Карьера в трансляционных исследований. Благодаря Тиму Эндрюс, детской гематологии / онкологии, за помощь сбора крови образца. Кроме того, благодаря д-р Сэм Wellhausen, Core проточной цитометрии, Джеймс Грэм Браун онкологического центра, за помощь в работе образцы проточной цитометрии.
White, W. N., Sethu, P. Automated Microfluidic Blood Lysis Protocol for Enrichment of Circulating Nucleated Cells. J. Vis. Exp. (34), e1656, doi:10.3791/1656 (2009).