Çekirdekli Hücreler Sirkülasyon zenginleştirilmesi için Otomatik mikroakışkan Kan Lizis Protokolü
Summary
Çekirdekli hücre zenginleştirme hücre kaybı olmadan yüksek kaliteli örnek izolasyonu sağlar eritrosit lizis ile periferik kan dolaşımını sağlamak için otomatik bir mikroakışkan cihaz geliştirildi.
Abstract
Bu raporda, otomatik bir mikroakışkan kan parçalama cihaz için protokol ayrıntılı. Lökosit ve endotel hücreleri içeren çekirdekli hücreleri (CNCs), Sirkülasyon, bireyin bağışıklık durumuna güncelleştirilmiş bir durum için ideal bir platform sağlar. Mikroakışkan protokolü, seçici hücre kaybı ve kullanıcı-aracılı adımları nedeniyle numune hazırlama değişkenliği olmadan CNCs zenginleşmesine olanak sağlar. Kısaca, protokol cihaz imalat, örnek toplama, cihaz kurulumu ve mikroakışkan haznesinden kan çalıştıran içerir. Cihaz içinde tam kan hızla yaklaşık 10 saniye 50 mikron x 150 mikron mikroakışkan kanal için deiyonize su ile karıştırılır. Bu süre içinde a eritrositlerin hipotonik koşulları nedeniyle parçalanmış. Kanalın alt Herringbone yapıları tam karıştırma ve sabit bir ortama hücreleri maruz kalma sağlar. Kalan hücreleri izotonik koşulları, cihazın çıkışında iade, 2% paraformaldehid kullanarak sabit CNCs eritrosit enkaz ayırmak için santrifüj ve akışı, tampon boyama ve flow sitometri ile analiz için askıya. Sonuçlar kaydedilir CNC nüfusa sahip temiz akış sitometri dağılım araziler göstermektedir. Bu cihaz ve protokol önemi CNC popülasyonlarının analizi ile hastalığın patogenezinde çalışma ve anlayış geliyor. Bu nedenle, otomasyon, etkinliği ve mikroakışkan protokol basitliği göstermiştir.
Protocol
Discussion
Otomatik bir mikroakışkan kan lizis protokol bildirilmiştir. Protokol kapsamında fazlalaştı kritik adımlar. P.2.1 bölümü, örnek yerinden olgun endotel hücreleri içeren yanlış pozitif olarak hareket olarak toplanan ilk kan şişe atmak için önemlidir. Ayrıca toplama bir saat içinde kan örneği çalıştırmak için emin olun. Astar bölümü P.2.2 mikroakışkan cihaz, başlangıçta baloncuklar kurtulmak için önemlidir. Ayrıca, bir protokol boyunca iğne şırınga takarken kabarcıkları almaktan…
Acknowledgements
Araştırma Translasyonel Araştırma Wallace H. Coulter Vakfı Erken Kariyer Ödülü tarafından desteklenmektedir. Tim Andrews, Pediatrik Hematoloji / Onkoloji, kan örneği toplama konusunda yardım için teşekkür ederiz. Ayrıca Dr. Sam Wellhausen, Sitometrisi Core, James Graham Brown Kanser Merkezi, flow sitometri örnekleri çalışan yardım için teşekkürler.
Referências
- White, W. Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD. Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).
- Sethu, P. Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis. Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).
