Nucleated कोशिकाओं परिसंचारी के संवर्धन के लिए स्वचालित Microfluidic रक्त lysis प्रोटोकॉल
Summary
एक microfluidic डिवाइस स्वचालित एरिथ्रोसाइट lysis है कि सेल हानि के बिना उच्च गुणवत्ता का नमूना के अलगाव सुनिश्चित करता है के माध्यम से परिधीय रक्त से nucleated सेल संवर्धन परिसंचारी के लिए विकसित किया गया था.
Abstract
इस रिपोर्ट में एक स्वचालित microfluidic रक्त lysis डिवाइस के लिए प्रोटोकॉल विस्तृत है. Nucleated (CNCs) leukocytes और endothelial कोशिकाओं सहित कोशिकाओं परिसंचारी, एक व्यक्ति की प्रतिरक्षा शर्त पर एक अद्यतन स्थिति के लिए एक आदर्श मंच प्रदान करते हैं. microfluidic प्रोटोकॉल चयनात्मक सेल घटाने और नमूना तैयार परिवर्तनशीलता उपयोगकर्ता की मध्यस्थता कदम के लिए कारण के बिना CNCs के संवर्धन के लिए अनुमति देता है. संक्षेप में, प्रोटोकॉल युक्ति छलरचना, नमूना संग्रह, युक्ति सेटअप, और microfluidic कक्ष के माध्यम से चल रहा रक्त शामिल हैं. डिवाइस के भीतर पूरे रक्त तेजी से एक 50 माइक्रोन x 150 माइक्रोन microfluidic चैनल में लगभग 10 सेकंड के लिए विआयनीकृत पानी के साथ मिश्रित है. इस समय अवधि एरिथ्रोसाइट्स hypotonic शर्तों के कारण lysed हैं. चैनल के तल पर herringbone संरचनाओं पूरी तरह से मिश्रण और एक निरंतर वातावरण में कोशिकाओं के जोखिम को सुनिश्चित करते हैं. शेष कोशिकाओं डिवाइस के बाहर निकलने पर isotonic शर्तों के लौट रहे हैं, का उपयोग कर 2% paraformaldehyde तय, CNCs एरिथ्रोसाइट मलबे से अलग centrifuged, और धुंधला हो जाना और प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण के लिए प्रवाह बफर में निलंबित कर दिया. परिणाम स्वच्छ प्रवाह cytometry सीएनसी बचाया आबादी के साथ स्कैटर भूखंडों दिखा. इस डिवाइस और प्रोटोकॉल का महत्व अध्ययन और सीएनसी आबादी के विश्लेषण के द्वारा रोग के रोगजनन के समझ में आता है. इसलिए, स्वचालन, प्रभावशीलता, और microfluidic प्रोटोकॉल के सादगी का प्रदर्शन कर रहे हैं.
Protocol
Discussion
एक स्वचालित microfluidic रक्त lysis प्रोटोकॉल बताया गया है. प्रोटोकॉल के भीतर टिप्पण लायक महत्वपूर्ण कदम उठाए हैं. P.2.1 अनुभाग में, यह महत्वपूर्ण है कि पहली रक्त नमूना उखाड़ फेंकना परिपक्व endothelial कोशिकाओं शामिल झूठी ?…
Acknowledgements
अनुसंधान translational अनुसंधान में वैलेस एच. कल्टर फाउंडेशन जल्दी कैरियर पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया. रक्त के नमूने संग्रह के साथ मदद के लिए टिम एन्ड्रयूज़, बाल चिकित्सा रुधिर / कैंसर विज्ञान, के लिए धन्यवाद. इसके अलावा डा. सैम Wellhausen, फ्लो Cytometry कोर, जेम्स ग्राहम प्रवाह cytometry के नमूने को चलाने के साथ मदद के लिए ब्राउन कैंसर केंद्र के लिए धन्यवाद.
Referências
- White, W. Clinical application of microfluidic leukocyte enrichment protocol in mild phenotype sickle cell disease (SCD. Biomedical Microdevices. 11 (2), 477-483 (2009).
- Sethu, P. Continuous Flow Microfluidic Device for Rapid Erythrocyte Lysis. Anal. Chem. 76 (21), 6247-6253 (2004).
