Cette procédure montre comment utiliser le système d'électroporation Gene Pulser MXcell rapidement et facilement d'identifier les meilleures conditions d'électroporation pour les fibroblastes embryonnaires de souris (MEF) ou d'autres cellules primaires. Considérations pour le dépannage sont également abordés dans la vidéo associée.
Il est de plus en plus évident que l'électroporation est le moyen le plus efficace pour introduire de l'ADN plasmidique ou siRNA dans des cellules primaires. Le système d'électroporation Gene Pulser MXcell et tampon d'électroporation Gene Pulser (Bio-Rad) ont été spécifiquement développés pour facilement transfecter des acides nucléiques dans les cellules de mammifères et difficiles à transfecter des cellules, telles que des cellules primaires et des souches. Nous allons montrer comment réaliser une expérience simple pour identifier rapidement les meilleures conditions d'électroporation. Nous allons démontrer comment exécuter plusieurs exemples à travers une gamme de conditions d'électroporation de sorte qu'une expérience peut être réalisée en même temps que l'optimisation est effectuée. Nous allons aussi montrer comment les conditions optimales identifiées en utilisant des plaques 96 puits électroporation peut être utilisé avec des cuvettes d'électroporation standard, facilitant le passage de plaques électroporation pour cuvettes d'électroporation tout en conservant l'efficacité d'électroporation mêmes. Dans la vidéo, nous allons aussi discuter de certains des principaux facteurs qui peuvent conduire à la réussite ou l'échec des expériences d'électroporation.
Cet article vidéo montre comment utiliser le système d'électroporation MXcell d'identifier facilement les conditions optimales pour l'électroporation FAE ou d'autres lignées de cellules primaires. Le format de plaque de 96 puits permet de nombreuses répliques de l'optimisation des conditions expérimentales ou à être effectuées simultanément, ce qui peut éliminer le besoin pour de nombreuses expériences distinctes. En effectuant cette procédure, il convient de rappeler d'utiliser des cellules saines dès que possible après l'isolement et à l'utilisation conditions d'électroporation qui sont appariés à la mémoire tampon d'électroporation.
The authors have nothing to disclose.
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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Gene Pulser® Electroporation Buffer | Bio-Rad Laboratories, Inc. | 165-2676 | ||
Gene Pulser MXcell™ Electroporation System | Bio-Rad Laboratories, Inc. | 165-2670 | ||
Gene Pulser MXcell™ ShockPod™ Cuvette Chamber | Bio-Rad Laboratories, Inc. | 165-2673 | ||
Gene Pulser MXcell™ Electroporation System With ShockPod™ Cuvette Chamber | Bio-Rad Laboratories, Inc. | 165-2674 |