Gravações de uma única célula de sucção de cones fotorreceptores rato

Resumo

Vamos mostrar como gravar respostas flash de cones do mouse usando um eletrodo de sucção.

Resumo

Haste e cone fotorreceptores na retina são responsáveis ​​pela detecção de luz. Na escuridão, nucleotídeo cíclico-gated (CNG) no segmento de canais externos são abertos e permitem o fluxo constante cátions para o interior através da membrana, despolarizando a célula. Exposição à luz provoca o fechamento dos canais de CNG, bloqueia o fluxo para dentro cação atual, e, portanto, resulta em hiperpolarização celular. Com base na polaridade de fotorreceptores, um método de gravação de sucção foi desenvolvido em 1970 que, ao contrário da técnica patch-clamp clássico, não requer penetrar a membrana plasmática

Protocolo

Fazendo eletrodos

1. Fazer a gravação usando eletrodos de um puxador de micropipeta e polonês os eletrodos com filamento de aquecimento sob o microscópio. Para mouse gravação de sucção cone de uma única célula, o diâmetro interno da ponta do eletrodo é de cerca de M 6-7.
2. Prepare eletrodos de referência. Pesar agar 1% em água destilada. Derreta a solução ágar-ágar em banho de água quente. Preencha as pipetas de vidro (L = 100 mm, OD / ID = 1/0.75 mm) com 1% agar usando seringa. Solidificar o ágar em temperatura ambiente por 10 minutos.
3. Cortar as pipetas em metades usando uma faca de diamante.
4. Mergulhe os eletrodos de referência na....

Discussão

De uma única célula de gravação de sucção de células fotorreceptoras foi desenvolvido três décadas atrás. Ele nos permite gravar trans-membrana mudança corrente induzida pela estimulação luminosa sem penetrar a membrana celular. Por causa da adesão celular de alta, é difícil isolar vara única saudável e cone da retina do rato como retina de anfíbios e é difícil encontrar cones individuais devido ao baixo percentual (3%) e tamanho pequeno. O segmento interno--in (IS-in) método de gravação supera esta dificuldade actual d.......