Encelliga Sug Inspelningar från fotoreceptorer Mus Cone
Summary
Vi kommer att visa hur man kan spela flash svar från enstaka mus kottar med hjälp av en sug-elektrod.
Abstract
Rod och kon fotoreceptorer i näthinnan är ansvariga för detektering av ljus. I mörker, cyklisk nukleotid-medierade (CNG) kanaler i det yttre segmentet är öppna och tillåter katjoner flöda stadigt inåt över membranet, depolariserande cellen. Ljusexponering utlöser stängningen av CNG-kanaler, kvarter för aktiv ning ström, och därmed resulterar i cell hyperpolarisering. Baserat på polaritet fotoreceptorer, var ett sug inspelning metod som utvecklats på 1970-talet att till skillnad från den klassiska patch-clamp teknik, kräver inte att tränga in i plasmamembranet<sup> 1</sup>. Rita den yttre segmentet in i en tättslutande glaspipett fylld med extracellulära lösning möjliggör inspelning på aktuella förändringar i enskilda celler på test-blixt exponering. Men denna väletablerade "yttre etapper-i (OS-in)" sug inspelning är inte lämplig för inspelningar mus kon, på grund av den låga andelen kottar i musen näthinnan (3%) och svårigheter att identifiera konen yttre segment. Nyligen var en inre etapper-i (IS-in) inspelning konfiguration utvecklats för att dra det inre segmentet / nukleära området kring fotoreceptor in i inspelningen pipetten<sup> 2,3</sup>. I denna video visar vi hur du spelar in från enskilda photoresponses musen konen med hjälp av encelliga sug elektrod.
Protocol
Discussion
Encelliga sug inspelning från ljusmätare celler utvecklades tre decennier sedan. Det ger oss möjlighet att spela in trans-membran aktuella förändringar framkallade av ljus utan att tränga igenom cellmembranet. På grund av hög cell-cell adhesion, är det svårt att isolera friska enda tappar och stavar från mus näthinnan som amfibie näthinnan och det är svårt att hitta individuella kottar på grund av den låga andelen (3%) och liten storlek. Den inre etapper-i (IS-in) inspelningsmetod övervinner detta prob…
Acknowledgements
Med stöd av Career Development Award från Forskning kring att förebygga blindhet, NIH bevilja EY 019.312, och fritt anslag från Forskning kring att förebygga blindhet och EY 02.687 (Ögonkliniken och Visual Sciences vid Washington University).
Referências
- Yau, K. W., Lamb, T. D., Baylor, D. A. Light-induced fluctuations in membrane current of single toad rod outer segments. Nature. 269, 78-80 (1977).
- Nikonov, S. S. Photoreceptors of Nrl -/- mice coexpress functional S- and M-cone opsins having distinct inactivation mechanisms. J Gen Physiol. 125, 287-304 (2005).
- Nikonov, S. S., Kholodenko, R., Lem, J., Pugh, E. N. Physiological features of the S- and M-cone photoreceptors of wild-type mice from single-cell recordings. J Gen Physiol. 127, 359-374 (2006).
- Applebury, M. L. The murine cone photoreceptor: a single cone type expresses both S and M opsins with retinal spatial patterning. Neuron. 27, 513-523 (2000).
- Cornwall, M. C., Fein, A., MacNichol, E. F. Cellular mechanisms that underlie bleaching and background adaptation. J Gen Physiol. 96, 345-372 (1990).
- Calvert, P. D. Phototransduction in transgenic mice after targeted deletion of the rod transducin alpha -subunit. Proc Natl Acad Sci U S A. 97, 13913-13918 (2000).
