Hemocytes תסיסנית לפזר מעל מכלול של העובר המתפתח. פרוטוקול זה מדגים כיצד הר התמונה באמצעות העברות אלה עוברים עם hemocytes שכותרתו fluorescently.
Abstract
תא מחקרים רבים כתובת הגירה באמצעות<em> במבחנה</emשיטות>, ואילו הסביבה רלוונטי מבחינה פיזיולוגית הוא זה של האורגניזם עצמו. כאן אנו מציגים פרוטוקול של הרכבה<em> תסיסנית melanogaster</em> עוברים הדמיה לחיות הבאות של hemocytes שכותרתו fluorescently, מקרופאגים עובריים של האורגניזם הזה. שימוש במערכת Gal4-כטב"מ<sup> 1</sup> אנחנו נוסעים הביטוי של מגוון, סמנים מקודדים גנטית מתויג fluorescently ב hemocytes לעקוב פיזור ההתפתחות שלהם לאורך העובר. בעקבות אוסף של עוברים בשלב הרצויה של פיתוח, סיסית החיצוני היא להסיר את העוברים הם רכובים אז בשמן halocarbon בין הידרופובי, גז קרום חדיר ו coverslip זכוכית הדמיה לחיות. בנוסף פרמטרים נודדות ברוטו כגון מהירות כיווניות, הדמיה ברזולוציה גבוהה יותר בשילוב עם השימוש כתבים הניאון של ה-F-אקטין microtubules יכולים לספק מידע מפורט יותר לגבי הדינמיקה של רכיבים אלה cytoskeletal.
Protocol
הכנה השג המתאים קווי תסיסנית המכיל hemocyte ספציפי Gal4 הנהג (למשל SRP-Gal4 2) ו כתב ניאון מקודדים גנטית כטב"מ תחת שליטה (למשל כטב"מ-GFP). זבובים הומוזיגוטים SRP-Gal4, כטב"מ-GMA 3 או crq-Gal4, כטב"מ-GF…
Discussion
האלמנטים החשובים ביותר של הליך זה הם מבחר של עוברים בריאים עם hemocytes שכותרתו ברורה לעלות אותם בזהירות מבלי לפגוע בהם. פעם הם עוברים בשמן halocarbon הם עמידים בפני התייבשות רכוב פעם ניתן הדמיה במשך כמה שעות. בידיים שלנו אנחנו hemocytes תמונה במשך שלוש שעות, עם התייבשות זניח של הע?…
Acknowledgements
פרוטוקול זה פותח דרך העבודה שלנו בתוך בשיתוף עם מעבדות של פול מרטין ואנטוניו חסינטו. אנו מודים מרכז במלאי Bloomington עבור שירות מעולה שלה ושל הקהילה תסיסנית להמשך לשתף קווי לעוף. BS ממומנת כרגע על ידי מענק לפרויקט BBSRC. WW ממומנת על ידי מלגה האמון Wellcome פיתוח קריירה.
Evans, I. R., Zanet, J., Wood, W., Stramer, B. M. Live Imaging Of Drosophila melanogaster Embryonic Hemocyte Migrations. J. Vis. Exp. (36), e1696, doi:10.3791/1696 (2010).