Живая съемка Дрозофилы Эмбриональные миграции гемоцитов
Summary
Дрозофилы гемоциты расходиться по совокупности развивающегося эмбриона. Этот протокол демонстрирует, как монтировать и изображение этих миграций использованием эмбрионов с флуоресцентно меченных гемоциты.
Abstract
Многие адреса исследования миграции клеток использованием<em> В пробирке</em> Методы, в то время как физиологически соответствующих среды является то, что самого организма. Здесь мы приводим протокол для монтажа<em> Дрозофилы</em> Эмбрионов и последующее жить изображений флуоресцентно меченных гемоциты, эмбриональные макрофагов этого организма. Использование Gal4-UAS системы<sup> 1</sup> Мы едем экспрессии различных генетически закодированы, флуоресцентно меткой маркеры в гемоциты следить за их развитием разгон всей эмбриона. После сбора эмбрионов в нужном этапе развития, внешней хориона удаляется и эмбрионов затем монтируется в галоидоуглеводородов нефти между гидрофобным, газ мембрану и стекло покровное для живого изображения. В дополнение к валовому миграционных параметров, таких как скорость и направление, более высокое разрешение изображения в сочетании с использованием флуоресцентных журналистам F-актина и микротрубочек может предоставить более подробную информацию о динамике этих цитоскелета компонентов.
Protocol
Discussion
Важнейшими элементами этой процедуры выбора здоровых эмбрионов с четкой маркировкой гемоциты и монтировать их тщательно, не повреждая их. Как только эмбрионы в галоидоуглеводородов нефти они устойчивы к обезвоживанию и как только установлен могут быть отображены на несколько часов. …
Acknowledgements
Этот протокол был разработан благодаря нашей работе внутри, так и в сотрудничестве с лабораториями Пол Мартин и Антонио Хасинто. Мы благодарим Центр Блумингтон фондовую его отличный сервис и сообщества дрозофилы для продолжения поделиться летать линий. БС в настоящее время финансируется СИББН грантового проекта. WW финансируется Карьера Wellcome стипендий фонда развития.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Cell strainer | BD Falcon | 352350 | 70μm pores | |
| Halcarbon oil 700 | Sigma | H8898 | ||
| Lumox/Petriperm dish | Sarstedt | 96077305 |
Referências
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Bruckner, K. The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila. Dev Cell. 7, 73-84 (2004).
- Dutta, D., Bloor, J. W., Ruiz-Gomez, M., VijayRaghavan, K., Kiehart, D. P. Real-time imaging of morphogenetic movements in Drosophila using Gal4-UAS-driven expression of GFP fused to the actin-binding domain of moesin. Genesis. 34, 146-151 (2002).
- Stramer, B. Live imaging of wound inflammation in Drosophila embryos reveals key roles for small GTPases during in vivo cell migration. J Cell Biol. 168, 567-573 (2005).
- Wood, W., Jacinto, A. Drosophila melanogaster embryonic haemocytes: masters of multitasking. Nat Rev Mol Cell Biol. 8, 542-551 (2007).
- Halfon, M. S. New fluorescent protein reporters for use with the Drosophila Gal4 expression system and for vital detection of balancer chromosomes. Genesis. 34, 135-138 (2002).
- Sullivan, W., Ashburner, M., Hawley, R. S. . Drosophila protocols. , (2000).
- Tepass, U., Fessler, L. I., Aziz, A., Hartenstein, V. Embryonic origin of hemocytes and their relationship to cell death in Drosophila. Development. 120, 1829-1837 (1994).
- Millard, T. H., Martin, P. Dynamic analysis of filopodial interactions during the zippering phase of Drosophila dorsal closure. Development. 135, 621-626 (2008).
- Doerflinger, H., Benton, R., Shulman, J. M., St Johnston, D. The role of PAR-1 in regulating the polarised microtubule cytoskeleton in the Drosophila follicular epithelium. Development. 130, 3965-3975 (2003).
- Olofsson, B., Page, D. T. Condensation of the central nervous system in embryonic Drosophila is inhibited by blocking hemocyte migration or neural activity. Dev Biol. 279, 233-243 (2005).
- Paladi, M., Tepass, U. Function of Rho GTPases in embryonic blood cell migration in Drosophila. J Cell Sci. 117, 6313-6326 (2004).
- Vlisidou, I. Drosophila embryos as model systems for monitoring bacterial infection in real time. PLoS Pathog. 5, e1000518-e1000518 (2009).
- Jacinto, A. Dynamic actin-based epithelial adhesion and cell matching during Drosophila dorsal closure. Curr Biol. 10, 1420-1426 (2000).
- Wood, W., Jacinto, A. Imaging cell movement during dorsal closure in Drosophila embryos. Methods Mol Biol. 294, 203-210 (2005).
- Kunwar, P. S. Tre1 GPCR initiates germ cell transepithelial migration by regulating Drosophila melanogaster E-cadherin. J Cell Biol. 183, 157-168 (2008).
